李晓光,卢会青,刘 敏,王延秀,李腾宇
(山东省泰安市中心医院:1.口腔科;2.手术室;3.麻醉科 271000;4.青岛大学医学院口腔系,山东 青岛 266003)
涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)是我国常见恶性肿瘤之一,约占涎腺恶性肿瘤的27%[1]。该肿瘤浸润性极强,具有嗜神经侵袭和易血行性转移的特性。手术切除仍是其治疗的最有效方法,但术后局部复发及转移是预后不良的主要原因。肿瘤术后的复发转移是一个多步骤的连续性的过程,肿瘤细胞的恶性增殖是其中的一个重要方面。本文采用免疫组化技术(SABC)对涎腺腺样囊性癌的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达及其临床意义进行探讨。
1 资料与方法
1.1 一般资料 32例涎腺腺样囊性癌组织均取自本院1984～2010年手术切除标本蜡块,患者年龄 38～71(平均52.7)岁,男11例,女21例。颈部淋巴结转移与否以术后病理检查结果为准。所有患者术前均未接受化疗或放疗,根据TNM国际统一分期法(UICC)进行临床分期,Ⅰ+Ⅱ 期23例,Ⅲ+Ⅳ期9例。组织学分型为管状型6例,筛孔型15例,实体型11例。其中大涎腺17例(腮腺7例,颌下腺 5例,舌下腺5例),小涎腺15例。蜡块制备5μ m厚连续切片,抗PCNA单克隆抗体进行免疫组织化学染色,并做常规苏木精-伊红(HE)染色。
1.2 免疫组织化学染色 第一抗体PCNA为武汉博士德公司提供,3,3′-二氨基苯联胺(DAB)为Sigma公司产品,染色方法参照试剂盒说明按SABC法进行。分别用1.5%正常兔血清和0.01 mol/L PBS液取代第一抗体作为替代对照和空白对照。用已证实PCNA染色阳性的乳腺癌切片作阳性对照。
1.3 PCNA标记指数(proliferating cell nuclear antigen label index,PLI) 绝大多数阳性细胞以胞核棕褐色染色,颗粒状或弥散,见图1,部分也可胞浆着色。观察500个肿瘤细胞,PCNA阳性细胞数所占的百分数即为PLI。
1.4 统计学处理 应用SPSS10.0软件进行数据处理,PCNA表达与临床病理的关系用χ2检验。P＜0.05差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 PCNA染色定位于细胞核,细胞核被染成棕黄色或褐色,核显色较深时,细胞质着色较浅,染色方式呈颗粒型或弥漫型,以前者多见。在涎腺腺样囊性癌不同分化程度或癌的不同区域,PCNA阳性细胞数量和分布呈异质性。
表1 PCNA表达与临床病理因素的关系
图1 PCNA阳性细胞核内含有棕褐色颗粒(免疫组化DAB染色×400)
2.2 PCNA指数在32例涎腺腺样囊性癌中为17%～92%,平均为(75.17±21.28)%,以PLI平均值分为低18例(17%～54.5%)、高 14例(54.6%～92%)两组进行分析。
2.3 PCNA表达与涎腺腺样囊性癌临床病理因素的关系 见表1。
3 讨 论
PCNA是近年来引起人们注意的一种与细胞增殖周期有关的基因,是1974年Miyachi在红斑狼疮患者组织中发现的,是一种相对分子质量为36×103的酸性核蛋白,是DNA聚合酶的辅助蛋白[2],定位于20号染色体上。含有6个外显子与5个内含子,长约7.0×103,在内含子之间及内含子与外显子之间存在大量重复序列,在 5′端和 3′端存在广泛的侧翼序列,这些侧翼序列参与细胞内的某些调控并受控于其他基因和细胞因子。PCNA与细胞增殖状态明显相关,是伴随细胞增殖而表达的一种核内蛋白。PCNA在增殖细胞中的含量变化有明显的周期性,在静止细胞中量很少,G1晚期开始增加,S期达高峰,G2、M期明显下降。这种变化与细胞内DNA复制的时相变化一致,说明其表达程度与细胞增殖周期关系密切,因此作为评价细胞增殖活性的指标之一[3]。
肿瘤生长不仅是病变体积的增长,更重要的是细胞增殖活性发生变化,增殖活性是了解肿瘤生物学行为的一个有用的辅助手段。肿瘤细胞增殖活性的增加可能导致多克隆亚群的产生并有助于其中的某些亚群获得浸润、转移的能力。在包括结肠癌、肺癌、甲状腺癌、胃癌的许多恶性肿瘤中,增殖活性与肿瘤转移潜能、复发均有显着相关性[4-6]。
目前对涎腺腺样囊性癌生物学行为的判断仍主要靠组织学分型和临床分期,但受主客观因素的影响,由于涎腺腺样囊性癌术后局部复发及转移是预后不良的主要原因,所以寻找可靠、准确的判定预后的指标已成为涎腺腺样囊性癌生物学行为研究的重点之一。本研究结果表明,PCNA指数与涎腺腺样囊性癌的病理类型、淋巴结转移、肿瘤部位及临床分期密切相关,说明增殖活性较高的肿瘤更易发生淋巴结转移,这与子宫内膜癌、胃癌、口腔癌报道结果一致[7-9]。在组织分化程度高的肿瘤中PCNA阳性细胞数少,染色较淡,呈棕色,而肿瘤组织分化程度低者,PCNA表达量高,染色加深呈棕褐色,有时呈颗粒状,反映出肿瘤细胞增殖活性和分化的一般规律,提示PCNA高表达者细胞增生活跃,生长繁殖能力更强,其分化差,恶性程度高。
以上表明PCNA在常规病理切片上能敏感检测肿瘤细胞增殖活性或状态,是判断涎腺腺样囊性癌患者预后的良好指标。这在其他类肿瘤检测中也有类似发现报道。PCNA免疫反应能原位检测肿瘤细胞增殖活性,其方法简便、重复性强,除可进行细胞动力学研究外,对指导临床肿瘤化疗和放疗,判断预后都具有重要价值。检测涎腺腺样囊性癌PCNA的表达可用于判断其恶性程度及预后,PCNA高表达者需严密随访,并加强术后辅助治疗。
[1]Tincani AJ,Del Negro A,Araujo PPC,et al.Management of salivary gland adenoid cystic carcinoma:institutional experience of a case series[J].Sao Paulo Med J,2006,124(1):26-30.
[2]Bravo R,Frank R,Blandell PA,et al.Cyclin/PCNA is the auxiliaryprotein DNA polymerase-delta[J].Nuture,1987,326(6112):515-517.
[3]Hsieh TC,Burfeind P,Laud K,et al.Cell cycle effects and control of gene expression by resveratrol in human breast carcinoma cell lines with different metastatic potentials[J].Int J Oncol,1999,15(2):245-252.
[4]Ng IO,Lai EC,Fan ST,et al.Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocel-lular carcinoma[J].Cancer,1994,73(9):2268-2274.
[5]周人杰,陈伟,闵家新,等.ICAM-1和PCNA在肺癌中的表达及其意义[J].重庆医学,2007,36(18):1834-1839.
[6] 李晓川,王严庆.MMP-2、MM P-9和 PCNA在大肠肿瘤中的表达及临床意义[J].重庆医学,2003,32(7):870-872.
[7]Nordstrom B,Strang P,Bergstrom K,et al.A comparison of proliferating markers and their prognostic value for women with endometrial carcinoma[J].Cancer,1996,78(9):1942-1942.
[8]Woods AL,Hanby AM,Hall PA,et al.The prognostic value of PCNA(Proliferating cell nuclear antigen immunostaining in gastrointestinal lymphomas[J].J Pathol,1990,161:342-351.
[9]李晓光,于肖鹏,赵海兰,等.PCNA在口腔鳞癌中的表达及其临床意义[J].泰山医学院学报,2005,26(1):20-22.
