廖艳丹，韩 庆
(湖北省宜昌市第二人民医院肿瘤医院妇产科 443000)
卵巢癌是女性最常见的三大恶性肿瘤之一，由于缺乏有效的早期诊断方法，多年来卵巢癌的5年生存率始终徘徊在30%左右[1]，因此，针对卵巢肿瘤发生、发展的研究有着重要意义。研究证实，表观遗传改变在恶性肿瘤中已是普遍现象，与肿瘤发生、发展关系密切[2]。CBX7(chromobox homolog 7)可以引起组蛋白H3K9三甲基转移酶Suv39h2的表达升高，从而引起组蛋白H3表观遗传的改变[3]。近年来研究发现，CBX7在甲状腺癌、膀胱癌和胰腺癌等多种肿瘤组织和细胞中低表达，被认为是一种新的抑癌基因[4-6]。目前，CBX7基因在卵巢肿瘤中的研究较少。本研究通过免疫组织化学法检测CBX7蛋白在正常卵巢组织及卵巢肿瘤组织中的表达，并分析CBX7蛋白与卵巢癌组织临床病理分期的关系，为卵巢癌分子水平的诊断和治疗提供依据。
1 资料与方法
1.1一般资料 收集本院妇产科2006～2010年手术切除的正常卵巢及卵巢肿瘤组织共90例。正常卵巢组织取材于子宫肌瘤或子宫腺肌症等手术同时行附件切除术的卵巢。所有标本一部分经10%甲醛固定后，石蜡包埋。其中，正常卵巢组织12例，良性卵巢肿瘤25例，恶性肿瘤53例。患者年龄最小16岁，最大78岁，平均年龄45岁。免疫组化标本经2名有经验的病理医生检查确诊并有完整临床病理资料。卵巢癌患者临床分期和组织学分级参照FIGO(国际妇产科联盟)卵巢癌分期和组织学分级标准:Ⅰ期20例，Ⅱ期6例，Ⅲ期22例，Ⅳ期5例;高分化19例，中分化16例，低分化18例。
1.2主要试剂 兔抗人CBX7多克隆抗体(invirtogen公司),免疫组化SABC试剂盒(武汉博士德生物有限公司)。
1.3方法
1.3.1免疫组织化学 将甲醛固定石蜡包埋的组织制备成4 μm厚连续切片并用多聚赖氨酸包被切片。脱蜡的切片在枸橼酸盐缓冲液中以高温行抗原修复并与相应的抗体4 ℃孵育过夜，免疫组化染色按照SABC试剂盒说明书进行操作。
1.3.2判定标准 以细胞核或细胞质中有棕黄色颗粒且染色强度高于背景非特异性着色为阳性细胞，在高倍镜下随机选取5个视野，计数细胞，阳性细胞数大于30%为阳性。
2 结 果
如封2图1所示，CBX7蛋白染色阳性细胞为胞浆深棕色颗粒，部分胞核内有深棕色颗粒(箭头所指为CBX7蛋白染色阳性细胞)。在总例数90例中，阳性率正常组织11/12(91.7%)，良性卵巢肿瘤组织20/25(80.0%)，卵巢癌组织18/53(34.0%)，正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织与卵巢癌组织中CBX7蛋白的表达逐渐降低，CBX7蛋白在卵巢肿瘤组织中低表达(P<0.01)。在53例卵巢癌中，FIGO手术-病理分期中CBX7阳性表达率如下：Ⅰ期55%(11/20)，Ⅱ期33.3%(2/6)，Ⅲ期18.18%(4/22)。Ⅳ期20%(1/5)。CBX7蛋白在不同FIGO手术-病理分期中表达不同，Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期比较表达差异有统计学意义(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期比较χ2= 4.465，P=0.033,表1)。结合病理诊断，CBX7蛋白在不同分化程度组织中的阳性表达如下：高分化卵巢癌52.6%(10/19)，中分化卵巢癌37.5%(6/16)，低分化卵巢癌11.1%(2/18)。高、中分化的卵巢癌与低分化卵巢癌比较，CBX7的表达有显着性差异(高、中分化与低分化相比χ2=4.901，P=0.027，表1)。
表1 CBX7蛋白的表达与卵巢癌临床病理特征之间的关系
续表1 CBX7蛋白的表达与卵巢癌临床病理特征之间的关系
3 讨 论
表观遗传学(epigenetic)是目前肿瘤研究领域的新热点[7]，主要包括DNA甲基化和组蛋白甲基化、乙酰化和磷酸化等。研究证实，表观遗传改变在恶性肿瘤中已是普遍现象，与肿瘤发生、发展关系密切[2]。
CBX7可以引起组蛋白H3K9三甲基转移酶Suv39h2的表达升高，从而引起组蛋白H3第9位赖氨酸三甲基化[3]。组蛋白H3第9位赖氨酸三甲基化(H3K9me3)是一种稳定的细胞异染色质和表观遗传失活基因核小体组蛋白特征性标志物，为DNA甲基化的关键性启动环节之一，该环节的启动可沉默相关癌基因转录，抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡，进而抑制肿瘤的发生[8]。近年来研究发现，CBX7在甲状腺癌、膀胱癌和胰腺癌等多种肿瘤组织和细胞中低表达，CBX7的缺失与肿瘤形成、生长、转移及预后密切相关，被认为是一种新的抑癌基因[4-6]。但CBX7在卵巢癌中的表达及作用并无报道。
本研究采用免疫组织化学方法检测CBX7蛋白在卵巢组织中的表达。结果表明在卵巢良性、恶性肿瘤中CBX7的表达与正常卵巢组织相比明显降低，差异有统计学意义。且卵巢恶性组织中，不同临床分期、不同分化程度的组织中CBX7的表达亦存在差异，据本研究分析Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌中CBX7蛋白表达低于Ⅰ、Ⅱ期卵巢癌组织。低分化组肿瘤的CBX7蛋白表达低于高、中分化组。
卵巢肿瘤是女性生殖器官常见肿瘤，也是病死率最高的妇科恶性肿瘤，由于卵巢位置较深，发病早期症状不明显，发现时多已是晚期。因此，卵巢癌发生、发展的研究具有重要意义。CBX7基因是表观遗传学中的重要调控因子，是一种新的肿瘤候选基因，其在肿瘤的发生、发展及治疗中的作用正在被不断地发现。本研究发现CBX7蛋白在正常卵巢组织及卵巢癌组织中存在着差异，且与临床分期、组织分化相关，提示CBX7基因可能对卵巢肿瘤的诊断和治疗提供辅助参考价值，但其作用机制尚不清楚，仍有待进一步的研究。
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