许艺珊 许艳冰 许惠贤 蒋 倩
（福建师范大学生命科学学院，福建 福州350108）
1 实验步骤
1.1 培养基母液的配制和保存
用电子天枰逐个称取，依次倒入盛有一定蒸馏水的烧杯中，搅拌混匀溶解，定容至1L，保存在棕色试剂瓶中，贴好标签，注明名称和日期。
1.1.1 MS大量元素母液
1.7g KH2 PO4+3.7g MgSO4·7H2O+16.5gNH4·NO3+19g KNO3+4.4g CaCl2·2H2O。
1.1.2 MS微量元素母液
4.46g MnSO4·4H2O+1.72g ZnSO4·7H2O+1.24g H3BO3+0.166g KI+0.05g Na2MoO4·2H2O+0.005g CuSO4·5H2O+0.005g CoCl2·6H2O。
1.1.3 MS铁盐母液
7.46g Na2·EDTA+5.56g FeSO4·7H2O。
1.1.4 MS有机母液
0.1g甘氨酸+0.02g盐酸硫胺素+0.025g盐酸吡哆素+0.025g烟酸+5g肌醇。
1.2 MS培养基的配制
1.2.1 配制培养液
用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量于1L烧杯中，制备培养液：100mlMS大量元素母液+5mlMS微量元素母液+5mlMSMS铁盐母液+20mlMS有机母液。
1.2.2 溶化琼脂与调pH
用天平分别称取琼脂7g、蔗糖30g，放入烧杯中，再加入蒸馏水750 mL，用微波炉加热直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，再加入生长调节物质：0.5mg/L NAA+2mg/L 6-BA，最后加蒸馏水定容至1L，搅拌均匀。用1 mol/L的NaOH溶液调节pH到6.2为止。
1.2.3 培养基的分装
溶化的培养基趁热分装，瓶中培养基的量约为瓶容量的1/5～1/4，每瓶大约40~50ml，分装23~30瓶即可，及时封盖瓶口，贴上标签。培养基配制完毕后，应立即灭菌。
1.3 实验器皿等的清洗、包扎、灭菌
在组培瓶中加入100ml蒸馏水，准备5瓶，封口包扎；取枪状镊子、普通镊子各1把、2把剪刀，用报纸和橡皮圈包扎好，作为诱导月季不定芽和愈伤组织的接种工具；培养基；2个500ml烧杯、3个培养皿（内有滤纸）用报纸包扎。将以上材料一齐放入高压灭菌锅进行高压灭菌。
1.4 外植体的灭菌消毒及接种
外植体先用肥皂水涮洗，再用流水冲洗干净，放入灭菌的烧杯中。将培养基、无菌水、接种工具、酒精灯等置于接种台，打开超净工作台紫外线开关，同时打开接种室内的紫外灯，用紫外灯照射30min，然后关闭室内的紫外灯，开送风开关，关闭台内的紫外灯，通风10min。再开日光灯进行无菌操作。
接种前用肥皂水洗手，并用酒精棉球擦拭双手和台面。将70%的酒精倒入外植体的烧杯中浸泡30s，再倒入0.1%HgCl浸泡10min，重复无菌水清洗5道。无菌滤纸吸干水分，将茎段和叶片放在装有滤纸的培养皿上吸干水分。接种时茎基部朝下，将其1/3部分植入培养基；叶片应包含一部分中脉，将叶片平置于培养基上，下表面朝下，接触培养基。
在培养瓶上写上日期，移入培养室进行培养。培养温度25度左右，光强1500~20000lx，光照时间14h/d。2周后观察诱导情况。
2 结果与分析
外植体对愈伤组织状态的影响：
经过实验观察，发现两种外植体经过培养均诱导出愈伤组织，叶片和茎段愈伤组织形态上差异不明显，愈伤组织多数呈淡黄色，松散程度不一，但叶片诱导率愈伤组织100%，比茎段稍高。
图1 月季茎段诱导愈伤组织
图2 月季叶片诱导愈伤组织
3 小结
叶片和嫩茎均可用于诱导愈伤组织。愈伤组织的形成与否和长势好坏还受外植体材料、生长调节剂浓度、消毒等诸多因素的共同影响。其中，生长调节剂的种类、用量及配比对调控植物器官产生愈伤组织的作用，还有待进一步研究。月季生长繁殖速度较慢，应用组织培养技术可大大缩短它的增殖周期，必将带来巨大的经济效益、社会效益。
［1］邱文青，季静，杜长城.月季组培最优条件的选择[J].天津农业科学，2009,15（3）：26-28.
［2］林小洁，李洪清.紫花月季组织培养与快速繁殖研究[J].安徽农业科学，2011,39(19)：11380-11381，11385.
［3］王艳红，龚束芳，车代弟.丰花月季愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养[J].东北农业大学学报，2007,38(2):161-165.
