胡 莲（泸州医学院附属医院药剂科 泸州 646000）
HPLC法测定胃痛宁片中甘草酸的含量
胡莲（泸州医学院附属医院药剂科泸州646000）
摘要：目的：建立高效液相色谱法测定胃痛宁片中甘草酸的含量。方法：采用Discovery C18柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相：乙醇－0.2mol·L-1醋酸铵溶液－冰醋酸（42∶56∶2），检测波长：254nm，流速：0.5mL·min-1，柱温：45℃。结果：甘草酸在0.198～0.892μg范围内呈良好线性关系，r＝0.9999，平均回收率为99.04%，RSD为1.5%。结论：该方法操作安全，简便，结果准确、可靠，可用于该制剂的质量控制。
关键词：甘草酸高效液相色谱法胃痛宁片
胃痛宁片是由甘草干浸膏、蒲公英提取物、氢氧化铝等6味药组成的中西药复方制剂，具有清热燥湿、理气和胃、制酸止痛之效，用于湿热互结所致胃、十二指肠溃疡、胃炎，症见胃脘痉痛、胃酸过多、脘闷嗳气、泛酸嘈杂、食欲不振、大便秘结、小便短赤。卫生部药品标准[1]中未收载含量测定方法，为有效控制药品质量，本文以甘草的有效成分甘草酸为指标，采用高效液相色谱法，流动相以乙醇作洗脱剂，建立了含量测定方法。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：HP-1100VWD系统，HP化学工作站；试剂：乙醇为优级纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。甘草酸铵对照品（110731-201116，以甘草酸计含量为91.2%）中国药品生物制品检定所，胃痛宁片（市售）。
2 实验方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：Discovery C18（5μm，4.6mm×250mm），流动相：乙醇－0.2mol·L-1醋酸铵溶液－冰醋酸（42∶56∶2），检测波长：254nm，流速：0.5mL·min-1，柱温：45℃。理论塔板数以甘草酸计算不低于3000。
2.2空白试验：按处方量制备缺甘草干浸膏的阴性对照样品，照样品测定方法项下操作，测定比较了样品、甘草酸对照品、阴性对照样品，结果在阴性对照样品色谱图中甘草酸色谱峰相应的保留时间处无干扰，样品中甘草酸与其他成分能较好分离，分离度大于1.5，见图1。
2.3线性关系：精密称取甘草酸铵对照品11.32mg，置25mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取3mL，加流动相稀释至25mL，摇匀，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液4.0、6.0、10.0、14.0、18.0μL进样，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，甘草酸的进样量（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程为：Y=14.55090X－26.84902，r＝0.9999。结果表明甘草酸在0.198～0.892μg范围内呈良好线性关系。
2.4精密度试验：精密吸取对照品溶液10μL，重复进样6次，测定对照品溶液峰面积，计算RSD为0.36%（n＝6）。
2.5重复性和稳定性试验：取同一批样品（20111013）6份，按样品测定项下所述方法测定，结果平均含量为2.85mg·片-1，RSD 为1.1%（n＝6）。取其中一份供试品溶液在室温下放置0、2、4、8、12、24h进行测定，结果表明样品在24h内稳定，RSD为0.85% （n＝6）。
2.6回收率试验：精密称取甘草酸铵对照品49.65mg，置25mL量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密称取已知含量的同一批样品（20111013）0.5g，置具塞锥形瓶中，共6份，分别精密加入上述对照品贮备液2、3、4mL（各2份），按样品测定项下所述方法测定，计算回收率，结果见表1。
Table 1 Recoveries of G lycyrrhizic Acid added to sam ple
2.7样品测定：取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取1.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇200mL，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，以上述色谱条件分析测定，分别测定3批样品，以外标两点法计算甘草酸含量，结果见表2。
Table 2 Results of sam ple determ ination（n=3）
3 讨论
3.1甘草酸对照品分别用甲醇和流动相作溶剂，在本色谱条件下，用流动相作溶剂其峰型、理论塔板数明显优于甲醇作溶剂。甘草酸在药材中常以钾、钙盐形式存在[2]，几乎不溶于无水乙醇，但易溶于热的稀乙醇，故样品采用稀乙醇作提取溶剂，经试验，稀乙醇回流提取1h可将样品中的甘草酸提取完全。
3.2参考文献[3，4]，在选用甲醇－醋酸铵溶液－冰醋酸、乙腈－冰醋酸作流动相进行试验时，甘草酸在较低流速下才能与其他成分较好分离，柱压较小。故考虑在低流速下以乙醇代替甲醇、乙腈作洗脱剂，经反复试验，以乙醇－0.2mol·L-1醋酸铵溶液－冰醋酸（42∶56∶2）作流动相时，只需适当提高柱温，也能获得较好分离，色谱峰形对称，柱压适中（约106bar），测得的含量与甲醇系统下测定的含量一致。甘草酸与相邻杂质峰的分离度在乙醇系统中约高于甲醇系统。
3.3本法用于胃痛宁片中甘草酸的含量测定，结果准确，操作安全，简便、快速，能有效控制该产品质量。
参考文献
[1]卫生部药品标准，中药成方制剂[S].第十七册，1998：198.
[2]杨云，冯卫生.中药化学成分提取分离手册[M].北京：中国中医药出版社，1998：95.
[3]中华人民共和国药典（一部）[S].北京:化学工业出版社，2005：59.
[4]付春梅，李章万，刘三康，等.乙醇-水反相高效液相色谱法在中药及中成药分析中的应用[J].药物分析，2000，20（1）：37-41.
Determ ination of G lycyrrhizic Acid in Weitongning Tablets by HPLC
Hu Lian（Sichuan，Luzhou 646000，China）
Abstract：Objective:An assay method was developed for determination of glycyrrhizic acid in Weitongling Tablets by HPLC.Methods: The Chromatographic conditions were as follows:column Discovery C18（5μm，4.6mm×250mm）;the mobile phase ethanol－0.2mol·L-1ammonium acetate solution－acetic acid glacial（42∶56∶2）and detection at 254nm.The flow rate was 0.5mL·min-1.Column temperature was at 45℃.Results:The liner range of glycyrrhizic acid was 0.198～0.892μg，r＝0.999 9.The average recovery was 99.04%，the RSD was 1.5%.Conclusion:The method was security，simple.The results were accurate and reliable.The method can be used for quality control of theWeitongling Tablets.
Key words:glycyrrhizic acid HPLC Weitongling Tablets
中图分类号：R927.2
文献标识码：A
文章编号：1672-8351（2016）01-0001-02
