薛淑媛 朱 丹 姚兴凤 贾 琦 王冬睿 李春燕
（内蒙古医科大学药学院呼和浩特010110）
急、慢性咽炎动物实验研究概况△
薛淑媛朱丹姚兴凤贾琦王冬睿李春燕*
（内蒙古医科大学药学院呼和浩特010110）
动物模型是药物疗效评价的良好实验载体，动物实验研究可为临床合理治疗提供依据，因此，建立一个适宜的实验性急、慢性咽炎动物模型是十分重要的。本文对近年来实验性急、慢性咽炎动物模型的研究现状做一综述，以期为广大研究者探索研究药物作用机制及各种治疗方法提供理论指导。
急性咽炎 慢性咽炎 动物实验研究 动物模型
1 引言
咽炎是一种常见的上呼吸道疾病，按照病程长短和病理改变程度分为急性与慢性咽炎，现代医学研究表明急性咽炎是由流感病毒、副流感病毒、柯萨奇病毒、腺病毒、鼻病毒、葡萄球菌、甲型链球菌、肺炎双球菌等病毒和细菌感染或高温、粉尘、烟雾等物理或化学因素刺激而引起的咽部黏膜的急性炎症[1～3]；慢性咽炎可能因急性咽炎多次复发或上呼吸道慢性炎症、反流性食管炎、慢性支气管炎等诱发，也可能由于长期受物理化学因素刺激或职业原因造成用嗓过度而引起[4～5]。急性咽炎常见的临床表现为咽干、咽痒、咽痛、有灼热感或异物感等局部症状，全身症状较轻；慢性咽炎临床表现为咽部不适、咽痒、有异物感、灼烧感、干燥感、刺激感，有的还有微痛感等局部症状，咽部的分泌物不易咳出，全身症状不明显。不论急性咽炎或慢性咽炎都给患者的正常生活带来极大的困扰，因此，对于治疗急、慢性咽炎的药物研究十分必要。
研究药物对急、慢性咽炎是否有效，动物实验研究非常关键。复制或建立成功的急、慢性咽炎动物模型，将对研究治疗咽炎及上呼吸道炎症的药物的疗效及其作用机制，提供科学依据和有价值的参考。本文将急、慢性咽炎动物模型的建立方法综述如下，以期为研究、复制或建立急、慢性咽炎动物模型提供参考。
2 急性咽炎动物模型研究概况
2.1氨水直接喷雾法：采用氨水直接喷雾于大鼠咽部的方法复制急性咽炎的动物模型，主要是利用化学物质刺激咽部黏膜，形成炎症。具体方法有刘雪艳等[6]采用15％的氨水溶液，给大鼠咽部进行喷雾，3揿/次，连喷3d，以制备大鼠急性咽炎模型；刘岩等[7]采用15％的氨水溶液，给大鼠咽部进行喷雾，2揿/次，相当于6μL氨水溶液，连喷3d，以制备大鼠急性咽炎模型；章晨峰等[8]采用25％的氨水溶液，2次/d在大鼠咽部喷雾，散布面积为150mm2，连喷3d，制备大鼠急性咽炎模型。
采用氨水直接喷雾的方法造模开始后，大鼠出现黏液分泌逐渐增多、咽部黏膜充血、肿胀呈鲜红色等现象；咽部组织炎性变化明显，黏膜下弥漫性炎症细胞浸润、局部溃疡、鳞状上皮明显增生；使用酶联免疫法测定模型组大鼠血清中相关细胞因子的水平，结果均明显高于正常大鼠[6～8]。由此可见，采用氨水直接喷雾的方法复制急性咽炎模型，模型局部与临床急性咽炎有一定的相似性，但该法对动物伤害比较大，容易出现口腔黏膜灼伤或肺部损伤等现象。
2.2氨水定点定量涂抹法：氨水定点定量涂抹的方法也是利用化学物质刺激咽部黏膜，以形成炎症。田华洁等[9]采用戊巴比妥钠将家兔麻醉，用扩鼻器将家兔口腔扩开，用微量进样器对兔咽后壁上方约1cm处，滴入6％的氨水溶液50μL，1次/d，连滴2d，制备家兔急性咽炎模型。造模后，家兔出现黏液性分泌物增多，咽部组织呈暗红色，无光泽，呈现急性充血肿胀状态，血常规检查显示中性粒细胞和嗜酸性粒细胞水平明显升高，以上改变提示造模成功。该方法建立的家兔急性咽炎模型与临床急性咽炎相似，与氨水直接喷雾法相比，对动物的损伤较小。
2.3细菌注射感染法：细菌注射感染的方法是利用病毒或细菌感染咽部黏膜组织，形成炎症。具体操作有贾恩礼等[10]用戊巴比妥钠将家兔麻醉，然后用镊子翻开上颌口颊，用带金黄色葡萄球菌的注射针头以接近水平方向点刺黏膜，使出血点感染细菌，24h后即可见受感染黏膜呈现明显的红肿或有点状的脓性分泌物，若一次不成功可进行二次感染，以此方法制备家兔急性咽炎模型。梁璐等[11]用带乙型溶血性链球菌的注射针头，给大鼠上颌口颊部分的口腔黏膜以接近与口腔黏膜水平方向，注入约为0.02mL细菌溶液，24h后重复感染一次，以制备大鼠急性咽炎模型。章晨峰等[8]用水合氯醛麻醉大鼠，然后翻开大鼠上颌口颊部分的口腔黏膜，用带金黄色葡萄球菌的注射针头，以接近水平方向，注入约为0.1mL细菌溶液，24h后重复感染一次，以制备大鼠急性咽炎模型。
通过细菌注射感染的方法制备急性咽炎模型，实验动物咽部出现红肿、受感染黏膜有点状的脓性分泌物，或出现黏膜上皮角化严重，钉突明显，腺体细胞肥大增生，黏膜的固有层、黏膜下层、肌层的间质可见明显的炎细胞浸润，但皮下出血和血管扩张较不明显的现象，血清中一氧化氮和髓过氧化物酶的水平较空白组明显升高，IL-1β、IL-6β、TNF-α等水平较空白组明显升高。该方法建立的急性咽炎模型，致病因素与临床急性咽炎相同，表征也与临床相近，说明该方法建立的急性咽炎模型成功。
3 慢性咽炎动物模型研究概况
3.1氨水直接喷雾法：该方法主要是利用低浓度的氨水溶液长时间刺激咽部黏膜，形成慢性炎症。具体操作有南淑玲等[12]采用2.5％的氨水溶液喷大鼠咽部，2次/d，3揿/次，连喷15d，制备大鼠慢性咽炎模型；王艺等[13]采用5％的氨水溶液喷大鼠咽部，喷雾3次/d，2揿/次，连喷21d，制备大鼠慢性咽炎模型；李雪梅等[14]采用4％的氨水溶液喷家兔咽部，喷雾2次/d，3揿/次，连喷14d，制备家兔慢性咽炎模型；李凯等[15]采用2.5％的氨水溶液给大鼠咽部喷雾，1次/d，3揿/次，连喷15d，制备大鼠慢性咽炎模型。
通过氨水直接喷雾的方法建立慢性咽炎动物模型，大鼠出现咽部黏膜组织和纤维组织明显增生，血管扩张、炎性细胞浸润等现象；家兔出现体重下降、频饮水、分泌物增多、纳食和自发活动减少，咽部充血、黏膜及其组织有不同程度出血、水肿，炎细胞浸润明显，并有严重淤血、局部成脓肿等现象，TNF-α等细胞因子水平显著升高，由此可见，采用氨水直接喷雾的方法可以复制慢性咽炎动物模型。
3.2氨水+松节油复合因素法：采用氨水+松节油法复制慢性咽炎模型，其中氨水作为刺激性物质，通过长时间局部喷雾反复刺激咽部黏膜，其间将松节油注射于咽部黏膜下，对咽部组织产生持续性刺激，二者结合，使咽部组织逐渐形成慢性炎症。具体方法有祁友松等[16]采用2.5％的氨水溶液，喷于兔咽部，1次/d，连喷20d，其间于d11将25％的松节油注射于兔咽部左右两侧黏膜下，每只动物按0.2mL/kg计算，制备家兔慢性咽炎模型；张丹丹等[17]采用2.5％的氨水溶液，喷于兔咽部，2次/d，连喷16d，d8将松节油注射于兔咽部黏膜下，每只动物0.5mL，制备家兔慢性咽炎模型。
采用本法复制慢性咽炎模型，模型动物的咽部黏膜炎性细胞浸润、水肿，上皮层发生轻度增生性改变，钉突延长，固有膜内见散在弥漫性炎细胞浸润，血管扩张明显，黏膜下层内黏液腺分泌较多，浆内含大量分泌颗粒，以上改变说明氨水+松节油法可成功复制慢性咽炎动物模型。
3.3细菌注射感染法：梁璐[18]给每只大鼠上颌口颊部分的口腔黏膜，以接近与口腔黏膜水平方向，用注射针头注入浓度为108cfu/mL的乙型溶血性链球菌溶液0.02mL，每3天重复感染一次，连续15d，以制备大鼠慢性咽炎模型。
采用本法制备慢性咽炎模型，大部分实验动物从造模开始就出现少纳食、频饮水、精神状态欠佳、体重增长缓慢的情况，造模结束后，大鼠咽部黏膜上皮增生明显，存在明显的炎细胞弥漫性浸润现象，血管扩张和显微组织增生现象明显，且伴有黏液腺分布，和空白组比较存在显著差异，说明该方法可成功复制慢性咽炎动物模型。
4 其他咽炎动物模型研究概况
4.1去势法：戚本明等[19]将大鼠麻醉后，切除双侧卵巢，30d后大鼠咽部黏膜发生萎缩性改变，成功制备大鼠萎缩性咽炎模型。
采用本法制备萎缩性咽炎模型，实验动物去势后15d开始，血清中的雌二醇水平显著降低，促黄体生成素水平显著升高；咽部黏膜组织在去势后30d开始发生萎缩性改变，说明该法可以成功制备萎缩性咽炎动物模型。
5 讨论
建立动物模型是药物疗效评价的重要环节，适宜的动物模型不仅能反映药物作用的效果，还能为临床合理治疗提供依据，建立成功的急、慢性咽炎动物模型对探索研究治疗咽炎的药物作用机制及各种治疗方法，具有重要意义。
采用致病菌致炎的动物咽炎模型，与人类发病机制较为相近，但是由于感染致病菌的动物具有一定的传染性，实验操作者会有被感染风险，对实验安全性要求较高，使该方法使用受限。
氨水直接喷雾法、氨水定点定量涂抹法、氨水+松节油法等以化学物质刺激致炎的动物咽炎模型，模型动物病理损伤和血清细胞因子指标变化与临床指标有一定的相似性，且操作方法简单、安全，虽然可能由于操作不当造成实验动物的黏膜损伤、肺灼伤等情况，但仍然是目前使用最广泛的模型建立方法。
去势法制备的动物咽炎模型，主要是使动物体内激素水平下降引起萎缩性咽炎，该模型对于研究治疗更年期女性因激素水平降低引发的咽部不适具有一定的帮助作用。
综上所述，广大研究者可以根据实验目的和条件选择适当的模型建立方法。
[1]张玉敏.喉痹源流[J].中国中医基础医学杂志，2003，9：50-51.
[2]陈意振，鲁莉萍，邹波，等.应用PCR技术检测小儿呼吸道病原体的研究[J].中国优生与遗传杂志，1997，（5）：44-45.
[3]韩永林，范彦祥.慢性咽炎病原菌的分布及耐药性研究[J].中国现代药物应用，2010，4（4）：157.
[4]张恩胜，史清明.慢性咽炎、鼻炎与接触粉尘、毒物关系的调查[J].安徽预防医学杂志，2003，9（1）：28-29.
[5]梁璐，朴晋华，马建丽.急性和慢性咽炎的发病机制与动物模型建立的研究现状[J].临床医药实践，2012，21（7）：540-543.
[6]刘雪艳，毛志刚，王平，等.咽炎清滴丸对急性咽炎大鼠模型抗炎机理研究[J].药学研究，2016，35（6）：319-321.
[7]刘岩，刘志洋.罗汉果水提液对于急性咽炎模型的大鼠的治疗作用[J].中国实验方剂学杂志，2014，20（19）：159-162.
[8]章晨峰，曹亮，衡晴晴，等.胆木叶片抗大鼠急性咽炎作用研究[J].中国实验方剂学，2015，21（23）：97-100.
[9]田华洁，黄晓星，王一飞，等.新型急性咽炎家兔模型的建立[J].世界临床药物，2014，35（4）：241-244.
[10]贾恩礼，冯成强，杨春梅，等.咽舒气雾剂抗菌作用的动物实验[J].前卫医药杂志，2000，17（4）：221-222.
[11]梁璐，朴晋华，高天红，等.注射用炎琥宁对实验性急性咽炎动物模型的疗效与作用机制研究[J].药物评价研究，2012，35（3）：165-168.
[12]南淑玲，谢丹，章健，等.养阴清肺汤对慢性咽炎大鼠病理形态学及血液流变学实验观察[J].杏林中医药，2010，30（9）：813-815.
[13]王艺，张玲，周家璇.咽炎消合剂对慢性咽炎大鼠咽黏膜修复作用的研究[J].现代中西医结合杂志，2015，24（15）：1600-1602.
[14]李雪梅，周建平.清音片祛痰对家兔慢性咽炎模型的作用[J].中药药理与临床，2012，28（4）：11-13.
[15]李凯，牛乐，贾利利，等.黄连阿胶汤不同煎煮方法对慢性咽炎大鼠的影响[J].中华中医药杂志，2014，29（3）：879-881.
[16]祁友松，王芳，褚伟，等.清咽雾化液对实验性慢性咽炎作用与药效研究[J].辽宁中医药大学学报，2011，13（5）：250-252.
[17]张丹丹，宋亚娟，王欣，等.利咽胶囊治疗慢性咽炎的药效学实验研究[J].中国临床药理学与治疗学，2011，16（3）：254-258.
[18]梁璐.复方利咽口服液的药效学实验研究[D].山西：山西大学化学化工学院，2012：14-21.
[19]戚本明，王正强，郑明秀，等.葛根总黄酮治疗去势大鼠萎缩性咽炎的实验研究[J].中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志，2002，10（6）：267-270.
△基金支持：2016内蒙古自治区创新创业训练计划项目（201610132001）；2016内蒙古医科大学英才培育项目；2016内蒙古医科大学实验室开放基金项目（2016ZN05）。
R766.14
A
1672-8351（2016）10-0121-02
