VITROS 5600分析仪检测3项心肌损伤标志物的性能评价

吴金斌，欧嘉文(北京大学深圳医院检验科，深圳 518036)



·临床探讨·

VITROS5600分析仪检测3项心肌损伤标志物的性能评价

吴金斌，欧嘉文
(北京大学深圳医院检验科，深圳 518036)

目的 验证和评价化学发光法检测心肌损伤标志物肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶质量(CK-MBmass)的分析性能。方法 参考NCCLS发布的方法学评价系列文件，对强生VITROS5600分析仪免疫模块化学发光法检测心肌损伤标志物3项的正确度、精密度、线性范围和参考区间进行验证与评价。结果cTnI、Myo和CK-MBmass正确度验证偏倚分别为-3.75%～4.58%、-4.10%～-1.04%和2.90%～1.63%，批内精密度分别0.89%～3.33%、0.90%～0.94%和1.10%～1.74%，天间精密度分别为1.53%～6.45%、2.2%～2.80%和1.45%～2.06%，各项目呈一次性线性关系，相关系数(r)分别为0.999 2、0.998 6和0.999 0(P<0.05)；按性别分组验证各项目的参考区间，结果显示大于95%的检测值在厂家提供的生物参考区间范围内。结论 强生VITROS5600分析仪化学发光法检测3项心肌损伤标志物的主要分析性能达到了厂商声明的性能和有关的质量要求，能够满足临床需要。

肌钙蛋白I； 肌红蛋白； 肌酸激酶同工酶质量； 化学发光法； 性能评价

急性冠状动脉综合征(ACS)是由急性心肌缺血所致的以胸闷、胸痛为主要临床表现的心血管疾病，它对患者的生命和健康构成严重威胁，早期诊断和及时治疗是降低病死率和改善预后的关键。因此，快速、灵敏、准确地检测心肌损伤生化标志物对于ACS的诊疗具有非常重要的意义[1]。为了向临床提供准确、可靠的检验结果，本试验依照ISO15189《医学实验室质量和能力认可准则》的要求[2]，参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)指南EP15-A2、EP5-A2、EP6-A2和C28-A2文件[3-6]，结合工作实际设计验证方案，对强生VITROS 5600分析仪化学发光法检测肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶质量(CK-MB mass)的分析性能进行验证和评价。

1 材料与方法

1.1 标本来源 试验血浆选取2014年8～9月北京大学深圳医院住院患者符合试验要求且无溶血、黄疸、脂血的标本。

1.2 仪器与试剂 检测系统使用强生公司VITROS 5600生化免疫分析仪及其配套试剂和校准品。

1.3 方法

1.3.1 正确度验证 参照EP15-A2文件，对校准后并且室内质控在控的试验项目进行非同一批次的定值校准品(2份)和卫生部临检中心发放2014年第1次心肌损伤标志物的质评样品(5份)各测定2次，将测定均值与相应校准品标定值、质评靶值相比较，以相对偏差小于该项目临检中心质评允许误差范围的1/2(<±15%)为可接受。

1.3.3 线性验证 参考 EP6-A2文件，设定各项目试验线性的允许误差范围为5.0%。分别收集cTnI、Myo、CK-MB mass各项目浓度接近厂商声明分析测量范围的下限和上限的低值标本(L)和高值标本(H)，然后按L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、H配制成6个系列浓度的标本，按照从低浓度到高浓度顺序测定1次，再从高浓度到低浓度顺序测定1次，在重复测定误差符合要求的条件下，进行多项式回归分析，将数据拟合为一次(Y=b0+b1X)、二次(Y=b0+b1X+b2X2)和三次(Y=b0+b1X+b2X2+b3X3)多项式，根据t值判断拟合曲线的非线性系数 (b2和b3)与 0的差异是否有统计学意义,如果非线性系数b2和b3与0比较差异无统计学意义(P>0.05)，则认为存在线性关系，否则该组数据存在非线性，则要进行非线性度的评价。

1.3.4 参考区间验证 按NCCLS C28-A2推荐的方法，从2014年8～9月在本院体检的人群中，选取年龄分布在18～70岁，排除心脑血管疾病，并且肝、肾功能正常的男性和女性健康体检者血清标本各20例，按照标准操作程序(SOP)要求在VITROS 5600分析仪上进行心肌损伤标志物3项的检测，在分组统计中，有95%(≥19例)的检测结果在厂商提供的参考区间内即表明该参考区间适用于本实验室。

2 结 果

2.1 正确度验证结果 检测cTnI、Myo、CK-MB mass的定值校准品和卫生部临检中心2014年第1次心肌损伤标志物质评样品，分别将测定均值与标准品标定值和质评靶值相比较。结果显示，各项目各浓度水平的偏倚程度均小于临检中心质评允许误差范围的1/2(<±15%),验证通过。见表1、2。

表1 检测定值标准品正确度验证

表2 检测质评标本正确度验证

2.2 精密度验证结果 3个项目低、高浓度标本的批内、天间不精密度验证结果见表3～5，各项目各浓度水平的批内和天间精密度均小于厂商标示的相应浓度水平的CV值。

表3 cTnI批内和天间精密度验证

表4 Myo批内和天间精密度验证

2.3 线性验证结果 cTnI、Myo、CK-MB mass的线性范围和6个系列浓度标本重复测定结果均值见表6，经计算重复检测集合方差(SDr)分别为0.48%、0.28%、0.35%，小于实验室设定允许误差范围5.0%。SSPSS 19.0统计软件多项式回归数据拟合结果显示，项目各指标b2、b3与0比较差异均无统计学意义(P>0.05)，为一次线性；cTnI线性方程为Y=1.020 8X-0.624 2，R2=0.998 4(P<0.05)；Myo线性方程为Y=1.018 1X+1.228 5，R2=0.997 3(P<0.05)；CK-MB mass线性方程为Y=1.022 4X-2.138 9，R2=0.998(P<0.05)。各项目试验线性范围与厂家声明的线性范围基本一致。

2.4 参考区间验证结果 依NCCLS C28-A2推荐的方法，验证现用厂家提供的生物参考区间，各项目参考区间及验证结果见表7，结果显示在不同性别组各20例健康参考个体中，Myo的男性组有1例超出厂商提供的参考区间(126 ng/mL)，其余各项目各组验证结果均在厂商提供的参考区间内，各项目参考区间验证符合率不低于95%，说明厂家提供的生物参考区间适合于本实验室使用。

表5 CK-MB mass批内和天间精密度验证

表6 心肌损伤标志物三项线性范围及验证值(ng/mL)

表7 3项心肌损伤标志物参考区间验证结果

3 讨 论

对分析系统的主要检测性能进行验证，是保证检验质量的一个重要措施，也是《医疗机构临床实验室管理办法》和医学实验室ISO15189《医学实验室质量和能力认可准则》的要求。本研究对强生VITROS 5600分析仪检测cTnI、Myo和CK-MB mass 3个项目的正确度、精密度、线性和参考范围分别进行了验证。

正确度是多次重复检测所得量值的平均值与一个参考量值间的一致程度。通常用“偏移”(或偏倚)表达，是对系统误差的衡量。本试验按照NCCLS EP15-A2文件执行正确度验证，采用厂商提供的可溯源定值校准品和卫生部临床检验中心指定值的质评物作为参考物质进行验证。通常生化定量测定项目以美国临床实验室修正法规(CLIA′88)允许总误差的1/2作为允许偏倚[7]，由于CLIA′88中没有对cTnI、Myo和CK-MB mass 3个项目的允许总误差进行规定，因此本试验以小于临检中心质评允许误差范围的1/2作为判断标准。

精密度是在规定条件下，对同一被测对象重复测量所得值间的一致程度，是对随机误差的衡量。检测系统的精密度是所有分析性能评价的基础，本试验采用EP5-A2文件验证厂商的精密度声明，考虑到基质效应，每个验证项目均采用健康人低值新鲜混合血清稀释高值样品，配制浓度范围包括了厂商声明的浓度和医学决定水平处的浓度。指定范围的低浓度标本的天间精密度水平反映了检测系统的功能灵敏度，在cTnI、Myo和CK-MB mass参考范围上限浓度处，天间精密度验证结果分别为 6.45%、2.80%、2.06%，符合准则[8]和共识[9]中对参考范围上限浓度处功能灵敏度的要求(cTnI 第99百分位值：0.034 ng/mL,CV≤10%；Myo第97.5百分位值：61.5 ng/mL,CV≤5.6%；CK-MB mass第97.5百分位值：61.5 ng/mL,CV≤9.3%)。

线性范围即分析测量范围(AMR)，是指标本没有经过任何预处理(浓缩或稀释)能够直接测定出待测物的范围，是反映方法学性能评价的重要指标之一。本试验应用NCCLS EP6-A2文件验证厂商声明的AMR，分析6个基本覆盖整个预期测量范围的系列浓度标本，在重复测量误差符合试验要求的条件下(≤5.0%)进行多项式回归分析，验证结果显示，各项目在试验所涉及的浓度范围内线性关系良好。

本试验按NCCLS C28-A2文件推荐的方法，每个项目按性别分为男、女两组，各选取了20例符合试验要求的健康体检者的血清标本，验证了cTnI、Myo和CK-MB mass试剂说明书中厂商提供的参考区间。验证结果在Myo的男性组中仅有1例超出厂商提供的参考区间，各项目及其分组参考区间验证符合率均不低于95%，符合NCCLS C28-A2文件要求，判定厂家提供的生物参考区间适用于本实验室。

综上所述，VITROS 5600分析仪检测3项心肌损伤标志物的主要分析性能验证结果与厂商声明的性能参数基本一致，符合相关文件规定和质量要求，能够为临床提供准确、可靠的检验结果，对ACS的诊断和治疗提供重要的参考信息。

[1]鄢盛恺.高敏感心肌肌钙蛋白检测的临床应用[J]．中华检验医学杂志，2010，33(9)：809-813．

[2]International Organization for Standardization．ISO 15189.Medical laboratories-Particular requirements for quality and competence [S].Geneva：ISO，2007．

[3]NCCLS．EP15-A2.User demonstration of performance for precision and accuracy[S].Wayne，PA，USA：NCCLS，2004．

[4]NCCLS．EP5-A2.Evaluation of precision performance of quantitative methods;approved guideline-second edition[S].Wayne，PA，USA：NCCLS，2004．

[5]NCCLS．EP6-A2.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].Wayne，PA，USA：NCCLS，2003．

[6]NCCLS.C28-A2.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory;approved guideline-second edition[S].Wayne，PA，USA：NCCLS,2000.

[7] 中华人民共和国卫生部.WS/T 403-2012.临床生物化学检验常规项目分析质量指标[S]．北京：中华人民共和国卫生部，2012．

[8]杨振华，潘柏申，许俊堂.中华医学会检验学会文件心肌损伤标志物的应用准则[J]．中华检验医学杂志,2002,25(3):185-189.

[9]胡大一.超敏心肌肌钙蛋白在急性冠状动脉综合征中的应用中国专家共识[J].中华心血管病杂志，2012，40(10):809-811.

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.21.051

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1672-9455(2015)21-3256-04

2015-01-13

2015-06-29)