陈超洪 王 优 李承燕 刘 玲 敖 当

广东医科大学附属医院儿童医学中心，广东湛江 524000

发育性癫痫性脑病（developmental and epileptic encephalopathy，DEE）是一组以发育障碍、难治性癫痫为特征的疾病[1]。其中DEE-95 与磷脂酰肌醇聚糖锚定生抑合成S 类（phosphatidylinositol glycan anchor biosynthesis class S，PIGS）；OMIM*610271）基因突变相关，是一种常染色体隐性遗传病，表现为婴儿期起病的难治性癫痫[2]，有多种癫痫发作类型[3]，以严重发育迟缓、肌张力减退、面部异常（拱形眉、杏仁眼、鼻梁低平、长人中、宽舌）为特征[4]，少数患儿共患孤独症谱系障碍[5]。本研究通过对表型相近的2 例难治性癫痫患儿进行基因检测，明确其致病原因，为临床诊断和遗传咨询提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2021—2022 年因“反复抽搐”就诊广东医科大学附属医院门诊的2 例患儿的临床资料及家族史。

病例1：8 岁女性患儿，因“反复抽搐7 年余”于广东医科大学附属医院（以下简称“我院”）门诊就诊。生后5 个月出现高热抽搐，表现为双眼上翻，面色发绀，双手握拳，四肢强直抖动，持续约2 min 后自行缓解。随后出现无热抽搐，表现同前，2～3 次/周，外院予丙戊酸（25 mg/kg）联合托吡酯（5.4 mg/kg）抗癫痫治疗后无发作2 年，遂自行停药。停药后半年再次出现抽搐，发作形式同前，持续1～2 min 后自行缓解，外院予单用丙戊酸治疗，仍有抽搐，1～3 次/月，至我院门诊进一步确诊后，予丙戊酸（25 mg/kg）联合维生素B6（10 mg/kg）治疗，目前1 年无发作。生长发育落后，4个月抬头，12 个月能坐，1岁11 个月扶走，3 岁半能独立行走。目前可独立行走，摇摆步态，语言落后，仅发“啊啊、吧吧”叠音，能执行“再见”等简单指令，不能自行进食。评估发育商26，其中大运动35 分，精细运动25 分，认知26 分，语言15 分，社交25 分。

病例2：6 岁女性患儿，因“反复抽搐5 年余”于我院门诊就诊。患儿生后6 个月无明显诱因出现抽搐，表现为双眼凝视，面色发绀，双手握拳，四肢强直，持续约3 min 后自行缓解。每月发作4～15 次不等，发作间期神志清楚。外院予丙戊酸（26 mg/kg）及托吡酯（6.0 mg/kg）抗癫痫治疗，仍每月发作2～8 次不等。至我院门诊进一步确诊后，予丙戊酸（25 mg/kg）、托吡酯联合维生素B6（15 mg/kg）治疗，抽搐发作较前好转，1～2 次/年。生长发育落后，5 个月抬头，11 个月能爬，1 岁10 个月独坐。目前不能独立行走，语言落后，仅发“啊啊”叠音，不能执行简单指令，不能自行进食。评估发育商14 分，其中大运动15 分，精细运动15 分，认知16 分，语言0 分，社交15 分。

2 例患儿查体反应迟钝，眼神呆滞，特殊面容（拱形眉、杏仁眼、眼距宽、鼻梁低平、长人中、宽舌），心、肺、腹未见异常，四肢肌张力减低，四肢肌力正常，双侧膝腱反射正常引出，病理征阴性，均未发现疝气或脊柱、四肢骨骼明显发育异常。2 例患儿既往史、出生史无特殊。父母表型均无异常，母亲孕期无异常，否认近亲结婚，否认家族中其他成员有癫痫病史。本研究已获得患儿家属知情同意及我院伦理委员会审查批准（YJYS2022173）。

1.2 研究方法

1.2.1 实验室检查 对2 例患儿进行血常规、尿常规、肝肾功能、心肌酶谱、血生化、血氨、同型半胱氨酸、血清铜蓝蛋白、血乳酸等，听力筛查、血尿串联质谱及脏器彩超、视频脑电图监测、头颅磁共振检测。

1.2.2 全外显子组测序 抽取2 例患儿及其家族成员静脉血各2 ml，外送深圳安吉康尔公司进行全外显与测序，提取全血基因组DNA，经PCR 扩增、测序，过程采用FastQC 软件做质量评估，使用BWA 软件进行序列比对。

1.2.3 Sanger 测序验证 由安吉康尔公司进行引物设计，基于转录本NM_033198.4，采用梯度PCR，PCR 产物经纯化后构建测序反应，使用ABI 3730XL 全自动测序仪进行测序验证。

1.2.4 突变分析 采用美国医学遗传学与基因组学学会（American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG）指南进行基因突变筛选及致病评级。

2 结果

2.1 实验室检查

2 例患儿的血常规、生化检查、血尿串联质谱筛查及染色体核型分析、脏器彩超、听觉诱发电位等未见异常，头颅磁共振示存在不同程度的异常（图1）。病例1 视频脑电图提示双侧额极稍多量慢波不同步发放；睡眠期右侧额、中央、顶区或额中央区、中线中央区少量尖波散发（图2A）。病例2 视频脑电图提示双侧额极不对称，右侧额极多量中-极高波幅混合慢波发放；睡眠期左侧额、额中央区、前颞、额极少量棘波、棘慢波散发；睡眠期前头部为主或广泛性慢波发放（图2B）。

图1 PIGS 基因突变致DEE-95 患儿头颅磁共振成像横断位图像

2.2 基因检测结果

全外显子基因和拷贝数突变检测示2 例患儿基因拷贝数变异检测结果阴性，PIGS 基因c.1141_1164dup（p.Asp381_ Val388dup）纯合突变（图3），此突变导致第381 号氨基酸天冬氨酸到第388 号氨基酸缬氨酸发·重复(p.Asp-381_Val388dup)，该突变在参考人群基因频率数据库（gnomAD）中最小等位基因频率未见记录（PM2），为非重复区框内插入/缺失或终止密码子丧失导致的蛋白质长度变化（PM4），根据ACMG 指南（PM2+PM4），该突变的致病性为意义不明确。Sanger 测序检测到父母均携带c.1141_1164dup（p.Asp381_ Val388dup）杂合突变，PIGS 基因突变所致DEE95 符合常染色体隐性遗传（图4）。

图3 PIGS 基因突变致DEE-95 患儿及父母Sanger 测序

图4 PIGS 基因突变致DEE-95 家系图谱

3 讨论

PIGS 基因参与糖基磷脂酰肌醇（glycosylphosphatidylinisotol，GPI）锚定生物合成过程[6]，与GAA1、GPI8、PIGT 和PIGU 组成GPI 转酰胺酶[7]，在突触功能、神经发育和可塑性中发挥作用[8]。PIGS 蛋白在小脑中表达最高[9]，是识别GPI 附着信号所必需的[10]。PIGS 基因突变导致GPI 生物合成缺陷，从而出现遗传性糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白缺陷（inherited glycosylphosphatidylinisotol-anchored protein deficiencies，IGD）[11]。IGD 是先天性糖基化障碍一类，占所有神经发育障碍病因的0.15%[12-13]，包括不同程度的智力/发育障碍、癫痫、肌张力减退、共济失调、先天性结构畸形等[14-16]。研究显示，GPI 转酰胺酶亚基等位基因的功能丧失会导致DEE[16-17]。

本研究家系中2 例患儿均在婴儿期出现频繁癫痫发作，伴严重发育落后和特殊体征（拱形眉、杏仁眼、眼距宽、鼻梁低平、长人中、宽舌），异常视频脑电图及头颅磁共振，单纯抗癫痫药物治疗效果欠佳，联用维生素B6治疗可改善癫痫发作。经全外显子组测序发现PIGS 基因纯合突变，该突变使所编码的蛋白失去原有功能，导致细胞膜表面的锚定蛋白合成缺陷，理论上有致病性，且该突变人群携带率低，被Clinvar数据库报道为致病（Pathogenic，https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/variation/1119956），综合2 例患儿临床表型特点，符合PIGS 突变致DEE-95，具有临床致病意义，需要更进一步的实验研究。检索国内外相关文献，本研究2 例患儿与文献报道中15 例DEE-95 患儿均存在重叠的临床表型，包括严重发育迟缓、婴儿期起病的难治性癫痫、肌张力减退、面容异常等，脑电图特征多表现为多灶性棘波和高波幅慢波，颅脑磁共振异常以额颞叶及小脑发育不全多见。15 例患儿中部分可伴随脊柱四肢骨骼畸形、视听功能障碍、心脏和泌尿系统发育畸形[18-20]。本研究中2 例患儿多系统受累情况较国外文献报道相对少，是否存在人种差异待进一步探索。目前DEE-95 治疗主要是多种抗癫痫药物联合使用[21-22]，国外曾报道生酮饮食和维生素B6对癫痫控制有效[23-26]，本研究1 例患儿加用维生素B6治疗达到无发作。

综上所述，PIGS 基因突变所致DEE-95 罕见，该病可累及神经、骨骼、视觉、听觉、泌尿、心血管等多器官系统，对于婴儿期起病的难治性癫痫，同时合并严重发育迟缓、肌张力减退、面容异常、颅脑磁共振异常等多种表型的患儿，建议行遗传学检测，对早期识别、精准诊断和遗传咨询有重要意义。现有治疗方案中可以观察到维生素B6治疗对于控制癫痫发作有积极作用。