黄启超，马青
冬奇子口服液对小鼠肝损伤保护作用的研究
黄启超，马青
目的通过建立四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝损伤模型，观察冬奇子口服液对肝损伤的的保护作用，并初步探讨冬奇子口服液的保肝机制。方法将50只ICR小鼠随机分为5组：对照组，CCl4致肝损伤模型组，低、中、高剂量的冬奇子给药组（1、2.5、5g/kg）。各组连续给药7 d，末次给药1h后，正常组腹腔注射调和油，其余各组腹腔注射0.1%CCl4调和油溶液（10 ml/kg），18 h后测定血清丙氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST），肝组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。结果低、中、高剂量的冬奇子给药组与肝损伤模型组比较，血清ALT分别降低16.27%（＜0.05）、64.96%（＜0.01）和113.77%（＜0.01）；血清AST分别降低33.79%（＜0.05）、61.20%（＜0.01）和87.31%（＜0.01）；肝组织MDA含量分别降低28.27%（＜0.05）、65.74%（＜0.01）和108.89%（＜0.01）；肝组织SOD活性分别增加13.82%（＞0.05）、27.31%（＜0.05）和40.73%（＜0.05）。结论冬奇子口服液对肝损伤具有保护作用，其机制可能与减少肝组织脂质过氧反应，增强SOD的抗自由基的能力有关。
丙氨酸氨基转移酶；天门冬氨酸氨基转移酶；肝损伤；丙二醛；超氧化物歧化酶；冬奇子口服液
冬奇子口服液由枸杞、五味子及麦冬等药材组成，主要含有多糖、皂苷及黄酮等有效成分，这些物质具有抗衰老[1]，提高机体免疫力[2]等功效。据研究报道，3种单药单独均有抗氧化[3]、抗肿瘤[4]及抗疲劳[5]等功效。但对肝损伤保护作用的报道相对不多。本研究采用腹腔注射四氯化碳（CCl4）致小鼠肝损伤模型，观察冬奇子口服液对肝损伤的保护作用，为今后临床应用冬奇子口服液预防肝损伤提供实验依据。现将结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 药物及试剂冬奇子口服液制备[6]：称取枸杞250g、五味子300g、麦冬300g，共3份按药材与水的质量比1∶3浸泡于大烧杯中24 h。提取：中药材（枸杞子、五味子、麦冬），超声波提取25 min 3次，浓缩至1∶1后过滤、滤液冷藏备用。CCl4为南京试剂厂产品，用调和油配成0.1%溶液。血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肝脏丙二醛（MDA）、肝脏超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒均为南京建成生物工程研究所。
1.2 动物及分组ICR小鼠（宁波大学实验动物中心提供），体质量（21.3±1.9）g，雄雌兼用，自由饮水、进食，将动物编号，按随机数字表法[7]分成正常对照组、CCl4损伤组、冬奇子给药组1（DOL1组）、冬奇子给药组2（DOL2组）、冬奇子给药组3（DOL3组），每组10只。正常对照组（CON组）：0.9%氯化钠注射液25m1· kg－1·d－1灌胃连续7 d后，腹腔注射调和油；CCl4损伤模型组（CCl4组）：0.9%氯化钠注射液25m1·kg－1·d－1灌胃连续7 d，末次给药后1 h，腹腔注射0.1%CCl4调和油溶液l0 ml·kg－1·d－1；DOL1组：给冬奇子口服液1 g ·kg－1·d－1灌胃连续7 d，末次给药后1 h，腹腔注射0.1%CCl4调和油溶液l0 ml·kg－1·d－1；DOL2组：给冬奇子口服液2.5 g·kg－1·d－1灌胃连续7 d，末次给药后1h，腹腔注射0.1%CCl4调和油溶液l0ml·kg－1·d－1；DOL3组：给冬奇子口服液5 g·kg－1·d－1灌胃连续7 d，末次给药后1 h，腹腔注射0.1%CCl4调和油溶液l0ml·kg－1·d－1；小鼠在腹腔注射CCl4后禁食过夜18 h后断头处死动物，立刻采血、取肝。测血清ALT和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肝组织MDA和SOD。
1.3 指标检测血清ALT和AST含量测定，肝匀浆SOD活性，MDA含量的测定，均按照试剂盒说明书操作，采用全自动生化分析器检测。
1.4 统计方法采用SPSS13.0统计软件进行分析，计量资料采用均数±标准差表示，采用检验。＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 冬奇子口服液对CCl4肝损伤血清ALT和AST的影响ALT的改变：CCl4损伤组比对照组高68.32%（=3.17，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3组分别与CCl4损伤组比较，分别降低16.27%（=2.23，＜0.05）、64.96%（=3.12，＜0.01）和113.77%（=3.56，＜0.01）。AST的改变：CCl4损伤组比对照组高51.13%（=3.21，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3组分别与CCl4损伤组比较，分别降低33.79%（=2.45，＜0.05）、61.20%（=3.09，＜0.01）和87.31%（=3.25，＜0.01）。见表1。
2.2 冬奇子口服液对CCl4肝损伤肝组织MDA、SOD的影响MDA参数改变：CCl4损伤组与对照组比较，高59.42%（=3.19，＜0.01）；DOL1、DOL2和DOL3组分别与CCl4损伤组比较，分别降低28.27%（=2.38，＜0.05）、65.74%（=3.54，＜0.01）和108.89%（=3.87，＜0.01）。SOD参数改变：CCl4损伤模型组与对照组比较，降低106.45%（=3.74，＜0.01）。DOL1、DOL2和DOL3组分别与CCl4损伤模型组比较，分别增加13.82%（=0.96，＞ 0.05）、27.31%（=2.22，＜0.05）和40.73%（=2.44，＜0.05）。见表1。
表1 冬奇子口服液对CCl4肝损伤小鼠血清ALT和AST含量的影晌
3 讨论
本实验选用经典的CCl4化学性肝损伤动物模型来观察冬奇子口服液的保肝作用。目前认为，CCl4引起肝细胞中毒与自由基加速脂质过氧化有关[8]，其过程如下：肝内主要被微粒体细胞色素P-450氧化酶代谢，生成两个活性自由基(CCl3·和Cl·)及一系列氧活性物与蛋白质共价结合导致蛋白合成障碍，脂质分解代谢紊乱，引起肝细胞内三酰甘油蓄积。CCl3·能迅速与氧结合转化为过氧化三氯甲烷自由基(CCl3O2·)导致脂质过氧化，引起细胞膜的变性伤害，使酶渗漏及细胞病变，坏死。CCl4诱发急性肝损伤病理学表现为肝细胞弥漫性变性、坏死、炎性细胞浸润，与临床病毒性肝炎病理变化极为相似。另一种观点认为[9]，白介素-6（IL-6）、IL-8可能参与肝脏炎性损伤过程。乙型肝炎病毒感染能诱导肝细胞合成大量肿瘤坏死因子（TNF-），而TNF-又可诱导肝细胞合成IL-6、IL-8，IL-6、IL-8可能又促进肝内炎症反应，介导肝细胞损伤，诱导各类细胞分化增殖，从而使慢性肝炎持续存在，导致纤维化形成。
本文结果显示：CCl4损伤组比对照组高68.32%，表现出高血清ALT，肝细胞严重受损；DOL1、DOL2和DOL3分别与CCl4损伤组比较，分别降低16.27%、64.96%和113.77%，说明冬奇子口服液可以降低ALT，并且存在剂量依赖性关系。（2）血清天AST的改变：CCl4损伤组比对照组高51.13%，出现高血清AST，表明肝细胞受损；DOL1、DOL2和DOL3组分别与CCl4损伤组比较，分别降低33.79%、61.20%和
87.31%，表明冬奇子口服液可以降低丙氨基转移酶，且也存在剂量依赖性关系。（3）MDA参数改变：CCl4损伤组与对照组比较，高59.42%，表明肝组织脂质过氧反应增加，自由基增多，肝细胞的氧化作用显着增强；DOL1、DOL2和DOL3分别与CCl4损伤组比较，分别降低28.27%、65.74%和108.89%，表明冬奇子口服液具有减少肝组织脂质过氧反应，增强抗自由基的能力，并存在剂量依存关系。（4）肝组织超SOD参数改变：CCl4损伤模型组与对照组比较，降低106.45%，表明SOD清除自由基能力降低，肝组织抗氧化作用显着减弱。DOL1、DOL2和DOL3组分别与CCl4损伤模型组比较，分别增加13.82%、27.31%和40.73%，表明冬奇子口服液可以增强肝脏组织SOD含量和抗自由基的能力，也存在剂量依存关系。
综上，本研究提示冬奇子口服液能防止CCl4引起的小鼠血清ALT的升高。其可能机制在于减少MDA肝组织脂质过氧反应，增强SOD抗自由基的能力。另外，冬奇子口服液含有的枸杞多糖具有降低细胞因子（IL-6、IL8）对肝损伤的作用[9]。
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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.04.039
R575.2；R285.5
A
1671-0800(2014)04-0438-03
315211宁波，宁波大学阳明学院（黄启超）；宁波大学医学院（马青）
马青，Email：maqing@nbu.edu.cn
