★ 陈玉兴 黄雪君 杜铁良 曾晓会 姚楠 黄丹娥 (广东省中医研究所 广州 510095)
银蓝调脂胶囊对实验性高脂血症大鼠的调血脂作用研究*
★ 陈玉兴**黄雪君 杜铁良 曾晓会 姚楠 黄丹娥 (广东省中医研究所 广州 510095)
目的:观察银蓝调脂胶囊对高脂血症模型大鼠血脂的影响,为临床用药提供实验依据。方法: 给予大鼠高脂饲料8周，制造高脂血症大鼠模型。造模4周后测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量，按血脂水平分组给药，测定灌服银蓝调脂胶囊4周后高脂血症模型大鼠甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、脂蛋白脂酶(LPL)、肝酯酶(HL)、游离脂肪酸(FFA)等指标的变化。结果:银蓝调脂胶囊能明显降低高脂饲料饮食所致实验性高脂血症大鼠血清TC、TG含量，升高HDL-c 、ApoA1含量和LPL、HL、总酯酶活性，降低LDL-c、ApoB、FFA含量，提高ApoA1/ApoB比值。结论:银蓝调脂胶囊具有明确的调节高脂血症的作用。
银蓝调脂胶囊；高脂血症大鼠
银蓝调脂胶囊为中药六类新药，经临床十余年应用筛选形成，由银杏叶、绞股蓝等中药组成，具有益气健脾、活血化瘀、祛痰利湿等功效，主要适用于气虚痰瘀阻痹型高脂血症的治疗。银蓝调脂胶囊处方及制剂工艺申请了专利1项，申请号2009100419601；获得国家食品药品监督管理局药物临床试验批件1项，批件号2012L01011。本实验主要对其调血脂作用进行了动物实验观察，为银蓝调脂胶囊临床治疗高脂血症提供实验依据。
1 材料与仪器
1.1 药品与试剂
银蓝调脂胶囊，由广东省中医研究所制剂室制备提供，批号090402；非诺贝特胶囊，法国利博福尼制药公司，批号93640；血脂康胶囊，北京北大维信生物科技有限公司，批号20090210；胆固醇，广州合达生物科技有限公司，批号20090512；猪油，市售猪板油炼制，临用现炼；丙基硫氧嘧啶，广州康和药业有限公司，批号20090211；胆固醇试剂盒，上海科欣生物技术研究所，批号20090602；甘油三酯试剂盒，上海科欣生物技术研究所，批号20090602；直接高密度脂蛋白胆固醇试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号090162；直接低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号090191；LPL/HL测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20090812；载脂蛋白A1测定试剂盒，上海荣盛生物药业有限公司，批号20090514；载脂蛋白B测定试剂盒，上海荣盛生物药业有限公司，批号20090514；游离脂肪酸FFA测试盒，南京建成生物工程研究所，批号20090812。
1.2 实验动物
SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重180～220g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK(粤)2008-0002，实验动物质量合格证号№0051076。实验环境，广东省中医研究所SPF级动物实验室，SYXK(粤)2005-0059。
1.3 仪器
JJ3000动物电子秤，Gamp;G公司产品；BS224S电子天平(1/万)，德国SARTORIUS产品； HH-6数显恒温水浴锅，金坛市富华仪器有限公司产品；3K30离心机，SIGMA公司产品；752N型紫外分光光度计，上海精密科学仪器有限公司产品。
2 方法
2.1 大鼠高脂饲料配制 参照文献方法[1]进行配制，大鼠高脂饲料组成：2%胆固醇，10%猪油，0.2%丙基硫氧嘧啶，87.8%基础饲料，由广东省医学实验动物中心加工配制。
2.2动物分组与模型建立[2]取SPF级SD大鼠84只，雌雄各半，按体重随机分为7组，分别为正常对照组、高脂模型组，非诺贝特组、血脂康组、银蓝调脂胶囊高、中、低剂量组，每组12只，雌雄分笼饲养，每笼6只。除正常对照组给予正常饲料外，其余各组大鼠每天上午9时左右每笼给予高脂饲料200g，下午5时左右换成正常饲料100g，自由饮水，连续8周。第4周末下午5时各组大鼠均禁食不禁水15小时，第2天8时各组大鼠均从眼眶静脉丛采血1mL，离心分离血清，按胆固醇试剂盒、甘油三酯试剂盒说明书测定大鼠血清中TC、TG含量作为大鼠给药前血脂水平。测定血脂水平后各给药组大鼠每天上午按剂量灌胃给予相应药物10mL/kg，正常对照组、高脂模型组给予等量蒸馏水，每天1次，连续给药4周。末次给药前各组大鼠均禁食不禁水15小时，末次给药1小时后取血，离心分离血清，分别按各试剂盒说明书测定各组大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoA1、ApoB、LPL、HL和FFA含量。
2.3 血脂及相关指标测定 血清总胆固醇(TC)测定采用胆固醇氧化酶法；甘油三酯(TG)测定采用甘油磷酸氧化酶法；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定采用磷钨酸-镁沉淀法；低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)采用聚乙烯硫酸沉淀法；载脂蛋白A (ApoA1)、载脂蛋白B (ApoB)测定采用免疫透射比浊法；脂蛋白脂酶(LPL)及肝脂酶(HL)试剂盒采用铜试剂比色法；游离脂肪酸(FFA)测定采用铜试剂比色法。均按试剂盒说明书步骤测定。
2.4 统计分析方法 所有计量资料以均数加减标准差( )表示。多组间均数的比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，组间均数两两比较，方差齐时采用SNK法；方差不齐时采用Dunnett's T3法。由SPSSl5.0软件完成。
3 结果
3.1 对进食高脂饲料所致实验性高脂血症大鼠血清TC、TG含量的影响
在造模4周后(给药前)各组造模大鼠与正常对照组大鼠相比，血清TC、TG含量均显着升高(Plt;0.01)。给药4周后，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清TC、TG含量仍明显升高(Plt;0.01)；与模型对照组相比，银蓝调脂胶囊5.148、2.574、1.287g生药·kg-13个剂量均能使高脂饲料饮食所致实验性高脂血症大鼠血清TC、TG含量明显降低(Plt;0.05或Plt;0.01)。详见表1。
表1 对实验性高脂血症大鼠血清TC、TG含量的影响
3.2 对进食高脂饲料所致实验性高脂血症大鼠血清HDL-c、LDL-c含量的影响
给药4周后，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清HDL-c、LDL-c含量均明显升高(Plt;0.01)；与模型对照组相比，银蓝调脂胶囊5.148g生药·kg-1剂量能使高脂饲料饮食所致实验性高脂血症大鼠血清HDL-c含量显着升高(Plt;0.01)、LDL-c含量明显下降(Plt;0.01)。详见表2。
表2 对实验性高脂血症大鼠血清HDL-c、LDL-c含量的影响
3.3 对进食高脂饲料所致实验性高脂血症大鼠血清ApoA1、ApoB含量的影响
给药4周后，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清ApoB含量明显升高(Plt;0.01)、ApoA1/ApoB比值显着下降(Plt;0.01)；与模型对照组相比，银蓝调脂胶囊5.148、2.574、1.287g生药·kg-13个剂量均能显着升高实验性高脂血症大鼠ApoA1含量和ApoA1/ApoB比值(Plt;0.05或Plt;0.01)，明显降低ApoB含量(Plt;0.01)。详见表3。
表3 对实验性高脂血症大鼠血清ApoA1、ApoB含量的影响
3.4 对进食高脂饲料所致实验性高脂血症大鼠血清LPL、HL、总酯酶活性的影响
给药4周后，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清LPL、HL和总酯酶活性显着下降(Plt;0.05或Plt;0.01)；与模型对照组相比，银蓝调脂胶囊5.148、2.574、1.287g生药·kg-13个剂量均能使高脂饲料饮食所致实验性高脂血症大鼠血清HL、总酯酶活性显着升高(Plt;0.01)，在一定程度上升高血清LPL活性。详见表4。
表4 对实验性高脂血症大鼠血清LPL、HL、总酯酶活性的影响
3.5 对进食高脂饲料所致实验性高脂血症大鼠血清FFA含量的影响
给药4周后，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清FFA含量显着升高(Plt;0.01)；与模型对照组相比，银蓝调脂胶囊5.148、2.574、1.287g生药/kg 3个剂量均能显着降低实验性高脂血症大鼠血清FFA含量(Plt;0.05或Plt;0.01)。详见表5。
表5 对实验性高脂血症大鼠血清清FFA含量的影响
4 讨论
高脂血症(hyperlipidemia，HLP)是诱发动脉粥样硬化、高血压、冠心病或其它心脑血管疾病的首要危险因素，动脉粥样硬化所致的心脑血管疾病是当前危及人类生命健康的主要疾病之一，有效防治HLP 已成为防治心脑血管疾病的重要环节。
2002年全国第四次营养调查数据显示全国血脂异常的人群约1.6亿，血胆固醇≥6.24 mmol/L人群在不同性别、年龄及地区35-74岁人群中的高胆固醇血症总患病率为(9.0±0.3)%。面临着严峻的血脂异常高发情况，我国对于血脂异常的知晓率、控制率及达标率却较低[3]，对于经济快速发展的中国来说，高血脂在整个21世纪，将会成为中国人健康的重大威胁。
西医对高脂血症的研究和治疗取得了较大的成果，临床常用的调血脂西药主要有[4,5]：(1)贝特类，该类药物通过激动PPARα，增加LPL酶活性，降低甘油三酯和胆固醇，但常有恶心、腹胀、腹泻、白细胞减少等不良反应；(2)他汀类，作用靶标为HMG-COA，主要降低胆固醇，降脂作用强，起效快，但有头痛、失眠、恶心等不良反应；(3)烟酸类，降低血清甘油三酯的作用较强，但易产生皮肤红斑、热感、瘙痒；(4)多烯不饱和脂肪酸类，该类药物与胆固醇结合成酯，促进其降解为胆汁酸，使血浆胆固醇浓度下降，该类药物具有抗血小板凝集作用，故需谨慎使用；(5)胆固醇吸收抑制剂，代表药物Ezetimibe，该药通过与胆汁酸结合，阻断胆汁酸重吸收，促进胆固醇转化为胆汁酸，从而降低体内胆固醇，常见不良反应有腹胀、恶心、便秘，不适合患有胃肠道疾病病人使用。此外，近年来他汀类、贝特类与他汀类合用引起的横纹肌溶解这一副作用受到了越来越多的关注，这严重影响了当前两大降血脂药物在临床上长期应用的安全性[6]。高脂血症临床需长期用药，西药长期用药所引起的肝肾功能、肌肉损害及停药后血脂反跳一直是西医治疗本病的难题[7]。
当前，降血脂药物研究策略及靶标主要有影响胆固醇合成、干扰脂质代谢和转运过程、促进高密度脂蛋白的形成、抑制低密度脂蛋白的形成以及抑制胆固醇的吸收等[8,9]。高脂血症病因病机较为复杂，由多因素引起并呈现多器官、多靶点同时病变的趋势，与西药单组分、单靶标的作用模式相比，中药的多组分、多靶点、毒副小、整体调节的作用特点更具优势。充分发挥中医药的特色和优势治疗高脂血症具有广阔的应用前景[10]。
中医学认为，脂质代谢紊乱乃由脏气亏虚、气化功能失调所致。因血脂为水谷精微物质所化，参与机体的营养与代谢。若脏气亏虚，气化功能失调，不能运化输布水谷精微至全身，多余之脂质则会滞留沉淀于血脉肌肉之中形成脂浊，进而影响血脉津液之运行以致痰浊、瘀血内着，终成脏气亏虚，痰瘀互结之错综复杂之病理变化[11]。是故痰浊瘀血阻滞是高脂血症的重要的病理基础，高脂血症的发生主要归结于脾、肾，脾肾虚弱为本，痰瘀互结为标[12]。
银蓝调脂胶囊功能益气健脾、活血化瘀、祛痰利湿，对气虚痰瘀阻痹型高脂血症有较好疗效。本实验研究证实，银蓝调脂胶囊能够显着降低外源性饮食性高脂血症大鼠TC、TG含量，升高HDL-c含量，降低LDL-c含量。其作用机理是通过提高ApoA1水平促进CE利用合成HDL-c，从而促进TC转化CE，降低了TC水平；通过降低ApoB水平，减少了LDL-c的合成；通过升高LPL、HL和总酯酶活性促进TG的水解代谢；通过降低FFA含量促进了TG的代谢活动。
实验提示银蓝调脂胶囊具有整体调节脂质代谢的作用，在高脂血症的防治方面具有良好的应用前景。
[1]陈奇.高脂血症的中药药效研究思路与方法.中药药效研究思路与方法[M].第1版.北京：人民卫生出版社，2005：638.
[2]唐春萍,郭姣,杨超燕，等.调脂灵对高脂血症大鼠脂代谢酶及载脂蛋白的影响[J].广东药学院学报,2007,23(2):175-177.
[3]胡大一,王家宏.我国血脂异常防治现状[J].中国实用内科杂志,2009,29(1):2-4.
[4]C. Hodel. Myopathy and rhabdomyolysis with lipid-lowering drugs[J]. Toxicology letters, 2002,128 : 159-168.
[5]林肖惠, 王玉丽, 徐为人.治疗高血脂症药物的研究进展[J].心血管病学进展,2008,29 :91-96.
[6]S.M. Jamal, M.J. Eisenberg, S. Christopoulos. Rhabdomyolysis associated with hydroxymethylglutaryl-coenzyme A reductase inhibitors[J].American heart journal, 2004,147 :956-965.
[7]寇芳.中医药治疗高脂血症研究进展[J].中医文献杂志,2010,16(2):55-57.
[8]O. Rau, H. Zettl, L. Popescu, et al. The treatment of dyslipidemia--what's left in the pipeline?[J]. ChemMed Chem, 2008,3:206-221.
[9]K.S. Jain, M.K. Kathiravan, R.S. Somani, et al. The biology and chemistry of hyperlipidemia[J]. Bioorganic amp; medicinal chemistry, 2007,15 : 4 674-4 699.
[10]肖世凤,杨英.中医药治疗高脂血症的研究进展[J].疾病监测与控制杂志,2009,3(6):380-382.
[11]方显明,秦小慧,李兰芳,等.安心颗粒对实验性高脂血症大鼠血脂及血液流变学指标的影响[J]. 中国实验方剂学杂志,2007,13(5):21-23.
[12]李玉兰. 从中医学角度探讨高脂血症的病因病机[J]. 四川中医,2010,28(3):17-18.
广州市科技计划立项资助项目(项目编号：2012J4100043)。
**作者简介：陈玉兴(1971-)，男，汉族，海南儋州人，主任中药师，主要从事中药配方颗粒和中药新药的研发工作，Tel:020-83576735, E-mail: cyx89333@qq.com 。
R 285.5
A
2013-07-29)
