傅金英，于胜男，徐萌萌，李瑞丽，杜 蕾
(河南中医学院，郑州 450003)
妇女绝经后心脑血管病的危险性较绝经前明显增加［1］。动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)普遍存在内皮功能障碍，是多种心脑血管疾病的共同病理基础。内皮功能障碍的主要原因是ET和NO平衡失调［2］。本实验研究了坤安煎剂对去卵巢大鼠血清NO、ET-1含量的影响，以探讨坤安煎剂对心血管的保护作用及其初步作用机理，为坤安煎剂在防治更年期心血管疾病的应用提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物饲养环境与分组
选用SPF级雌性成年Wistar大鼠52只，体质量(200±10)g，由山东鲁抗实验动物中心提供(动物质量许可证号SCCXK(鲁)20080002)。室温20℃左右，湿度70%，通风、清洁，饲料、供水充足，环境安静。实验环境符合SPF级动物实验室要求。
动物购进适应喂养1周后，按随机数字表法分为4组。空白组不予任何处理;模型组摘除大鼠双侧卵巢，术后7 d给予生理盐水灌胃，10 ml/kg/次，连续8周;中药组摘除大鼠双侧卵巢，术后7 d给予中药“坤安煎剂”灌胃，10 ml/kg/次，相当于成人等效剂量的6倍，连续8周;补佳乐组摘除大鼠双侧卵巢，术后7 d给予补佳乐生理盐水混悬液(0.01 mg/ml)灌胃，10 ml/kg/次，相当于成人等效剂量的6倍，连续8周。
1.2 药物与试剂
坤安煎剂组成:北沙参15 g，知母15 g，山茱萸15 g，黄柏12 g，枸杞20 g，黄芪30 g，地骨皮15 g，茯苓15 g，女贞子15 g，旱莲草30 g，杜仲20 g，淫羊藿30 g，煅龙骨 30 g，煅牡蛎30 g，丹参30 g，酸枣仁 30 g。所用生药饮片由河南省中医药研究院制剂室提供，按照本院制剂标准浓煎、过滤，所煎药液浓缩至每毫升含生药3.52 g，4℃冰箱保存备用;补佳乐片(戊酸雌二醇片)1 mg/片，法国Delpharm Lille SAS进口药品(批号J20080036);盐酸氯胺酮注射液2 ml:0.1g/支，由福建古田药业有限公司生产(批号H35020148);注射用青霉素钠80 U/支，由华北制药股份有限公司生产(批号H13020657);生理盐水500 ml/瓶，由河南太龙药业股份有限公司生产(批号H41023506)。
1.3 标本采集与指标检测
末次给药24 h后称取各大鼠体质量。以10%水合氯醛麻醉后，腹主动脉取血5ml，离心出血清，储存于低温冰箱待测。检测各大鼠血清内皮素-1(ET-1)采用酶联免疫吸附法检测，试剂盒来自伊莱瑞特生物技术有限公司;一氧化氮(NO)采用硝酸还原酶法检测，试剂盒来自南京建成生物工程研究所。检测方法按试剂盒说明书进行操作。
1.4 统计学方法
采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析，所有数据以均数±标准差(±s)表示，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
表1 各组大鼠血清NO、ET-1含量比较(±s)
表1 各组大鼠血清NO、ET-1含量比较(±s)
注:与空白组比较:＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05;与模型组比较:#P ＜0.01，与补佳乐组比较:△P＜0.01
组 别 例数 血清NO(μmol/L)血清ET-1(pg/mL)空 白 组 10 42.75±2.87△ 55.31±1.89△模 型 组 10 17.54 ±2.52＊＊△ 75.14 ±0.83＊＊△中 药 组 10 28.62 ±2.82＊＊#△ 66.95 ±4.70＊＊#△补 佳 乐 组 10 37.53 ±2.69＊＊# 58.55 ±3.81*#
表1显示，与空白组比较，模型组大鼠血清NO显着下降，差异有统计学意义(P＜0.01);血清ET-1显着升高(P＜0.01)，差异有统计学意义。与模型组比较，中药组和补佳乐组大鼠血清NO明显升高，差异有统计学意义(P＜0.01);血清ET-1下降，差异有统计学意义(P＜0.01)。
3 讨论
更年期是妇女一生中的重要时期，是妇女从生育期向老年期过渡的必经时期［3］。随着卵巢功能逐渐衰退，雌激素水平的下降，近期易导致潮热、盗汗、心悸、抑郁、失眠等;远期易致骨质疏松、泌尿生殖道改变及心血管疾病发病率增加［4］。现代研究关于更年期综合征远期并发症的研究较少，而心血管疾病是危害绝经后妇女身体健康的主要因素。故导师傅金英教授结合其多年的临床经验自拟经验方坤安煎剂防治更年期综合征，以补肾填精为主，药用女贞子、旱莲草、枸杞补益肝肾;淫羊藿、杜仲补肾助阳，以助阳中求阴;以北沙参、知母、地骨皮、黄柏养阴退热;山萸肉、煅龙骨、煅牡蛎3味药收敛固涩、镇惊安神;黄芪、茯苓健脾益气，补后天以滋养先天;丹参活血祛瘀，酸枣仁养心安神。纵观全方，诸药合用、标本兼治，共奏滋阴补肾、填精益髓之效。
NO是由血管内皮细胞合成的一种酶催化的生物活性物质，其前体是L-精氨酸，具有强力扩张血管、抑制血小板黏附和聚集［5］、白细胞的趋化激活、抑制血管平滑肌细胞的增殖移行、保护血管内皮细胞、防止心肌细胞缺血的作用，是心血管系统的重要调节因子［6］。ET-1为主要的缩血管因子，是迄今所知最强的缩血管物质，还可诱导血小板聚集，导致血栓形成，增加单核细胞迁移、促进平滑肌细胞增殖等作用［7］。ET通过激活钙通道增加钙离子内流，促进血管平滑肌收缩。在内皮损伤时其合成或释放增加，并与血管平滑肌上的受体结合，增加血管紧张度而使血管收缩。ET和NO之间存在着相互促进、相互抑制的复杂关系，共同调节心肌、血管的舒缩状态和平滑肌细胞的增殖情况，直接或间接地影响心功能［6］。临床实验表明，高血压、动脉粥样硬化、心绞痛、慢性心力衰竭、心肌病等心血管疾病常伴有NO、ET的异常，而NO、ET的异常又反过来加重心血管疾病，所以两者之间有着密切关系的NO和ET是维持血管基础张力的主要血管活性物质［8］。
本实验研究表明，坤安煎剂在影响血管内皮功能方面可明显升高模型大鼠血清NO含量，降低大鼠血清ET-1含量，说明坤安煎剂通过改善受损内皮功能，调节血管活性物质的分泌、释放及不同活性物质间的平衡，以调节血管紧张度增加局部血流量，恢复血管的自稳态，有助于为临床预防绝经后心血管疾病提供理论依据。
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