宋 擎， 柴秋彦，张立伟,*

(1.山西大学分子科学研究所，山西 太原 030006；2.山西省医药与生命科学研究院，山西 太原 030006)

当前治疗恶性肿瘤的手段主要以手术切除和化疗为主，传统的化疗药物如烷化剂、抗代谢类药、铂类化合物等由于其不良反应过强，往往造成患者不耐受并增加了患者的痛苦。近几十年的研究已将重点转移到对天然抗肿瘤药物的开发和利用。中药的抗肿瘤疗效确切，并且低不良反应，部分中药还有调节机体免疫功能、抑制肿瘤转移等作用，在抗肿瘤治疗中的优点尤为突出。目前很多中药已成功应用于临床，其疗效肯定，患者容易耐受。所以，寻求更多此类新型的治疗药物已成为研究的热点。

芦笋(Asparagus officinalisL.)又名石刁柏、龙须菜，为百合科天门冬属宿根性多年生草本植物，其营养价值高，《神农本草经》中将之列为“上品之品”。芦笋除含有多种游离氨基酸、维生素、微量元素硒、铁、锌及蛋白质、碳水化合物等营养成分外，还含有皂苷[1-2]、黄酮类[3-4]物质等具有药用价值的化学成分，因此也具有较高的药用价值。研究表明：芦笋提取物对肿瘤细胞的DNA 和RNA的生物合成有显着的抑制作用[5]；体外抑瘤实验证明其对胃癌、白血病、肝癌均有一定抑制作用；体内抑瘤实验发现芦笋提取物对S180小鼠肉瘤、小鼠艾氏腹水癌的生长具有抑制作用[6-7]。另外，Kawano等[8]对芦笋有效成分进行了分离、鉴定，证实芦笋皂苷C和D对小鼠移植性乳腺癌、胰腺癌、子宫颈癌的生长具有抑制作用。上述研究结果说明芦笋含有抗肿瘤活性的化学物质，为进一步阐明芦笋抗肿瘤活性的物质基础，本实验研究芦笋总皂苷对小鼠移植性肿瘤S180、H22的抑制作用。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

清洁级ICR小鼠，体质量(22～25g)，雌雄各半，由北京军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK—(军)2002-001；小鼠移植性肿瘤：肉瘤(S180)、肝癌(H22)，均由山西省肿瘤医院肿瘤研究所提供；芦笋粗总皂苷由本室自制。

注射用环磷酰胺(CY，批号：071108) 江苏恒瑞医药股份有限公司；5-氟脲嘧啶(5-Fu，批号：070402) 南通精华制药有限公司；其他试剂均为国产分析纯。

DK-98-Ⅰ型数字恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司；TD18单盘光学天平 湘仪天平仪器厂；OLYMPUS BH-2型光学显微镜 奥林巴斯光学工业株式会社；血球计数仪XB-K-25 上海医用光学仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 芦笋总皂苷的制备

称取芦笋茎皮粉末2.0kg，依次用15倍量、10倍量70%乙醇，回流提取两次，每次0.5h。合并两次提取液，过滤，滤液用水饱和正丁醇萃取3～5次，合并正丁醇层，浓缩至浸膏，得到正丁醇部分。称取D101大孔吸附树脂1000g，装柱，按照大孔吸附树脂预处理方法进行预处理。将正丁醇部分上样，水洗至流出液无色，然后依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇梯度洗脱，合并40%、60%、80%洗脱液，浓缩至干，得到芦笋粗总皂苷40.6g。用茴香醛硫酸法[9]测定其总皂苷含量为38.82%，每1g总皂苷约相当于50g药材。

1.2.2 总皂苷溶液配制及用量

将芦笋总皂苷用注射用水配成溶液，高剂量组每鼠给药1.0g/kg bw，中剂量组每鼠给药0.5g/kg bw，低剂量组每鼠给药0.25g/kg bw。环磷酰胺(CY)组每鼠给药30mg/kg bw，作为S180小鼠肿瘤阳性对照；5-Fu尿嘧啶组每鼠给药50mg/kg bw，作为H22小鼠肿瘤阳性对照。

1.2.3 抗肿瘤作用实验

取接种7d处于指数生长期，且动物健康状况较好的种鼠，颈椎脱臼处死后抽取腹水3mL，用无菌生理盐水配成1:4～1:6的肿瘤细胞悬液，肿瘤细胞计数S180为1.6×107个/mL，H22为1.85×107个/mL。在每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2mL。实验设阴性对照组，阳性对照组，高、中、低剂量组共5组，每组1 0只，雌雄各半。给药前称体质量，于接种后24h开始灌胃给药，每天固定时间段给药1次，阴性对照组给同等体积生理盐水，连续10d。末次给药后24h称体质量，摘取眼球取血后处死，完整剥离肿瘤、脾脏、胸腺等组织。分别称量各组小鼠瘤重及脾脏、胸腺等器官的质量，并计算其体质量增长率、抑瘤率和脾脏、胸腺指数。

1.2.4 数据统计处理

实验数据以平均值±标准差表示；以Excel-2003进行t检验统计处理。

2 结果与分析

2.1 芦笋总皂苷对S180、H22荷瘤小鼠体质量的影响

表1 芦笋总皂苷对S180、H22荷瘤小鼠体质量的影响(n=10)Table1 Effect of total saponins from Asparagus officinalis on body weight of tumor-bearing mice (n=10)

由表1可以看到，与阳性对照药环磷酰胺相比，不同剂量组小鼠体质量均有明显的增长，其中高剂量组和低剂量组小鼠体质量增长幅度均超过了阴性对照组，说明芦笋总皂苷对小鼠的体质量增长无明显影响。

2.2 芦笋总皂苷对小鼠移植性肿瘤S180、H22的抑制作用

依次对不同组别小鼠剥离的肿瘤组织进行称量，并进行组间t检验。

表2 芦笋总皂苷对S180、H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用(n=10)Table2 Inhibitory effects of total saponin from Asparagus officinalis on the growth of S180 and H22 cells (n=10)

表2结果显示，不同剂量的芦笋总皂苷对肿瘤生长均有不同程度的抑制作用，随给药剂量的增加，对肿瘤的抑制作用也逐渐加强，呈现较好的量效关系。一般认为抑瘤率达到30%以上时，药物有效，而高剂量组S180抑瘤率达到39.53%，H22抑瘤率达到34.81%，说明芦笋总皂苷具有抗肿瘤效果。t检验结果表明，高剂量组和阳性对照组瘤重与阴性对照组存在显着差异，说明芦笋总皂苷对S180和H22肿瘤存在一定的抑制作用。

2.3 芦笋总皂苷对S180、H22荷瘤小鼠主要免疫器官质量的影响

依次对不同组别小鼠剥离的脾脏和胸腺组织进行称量，计算相应指数并进行组间t检验，给药组与阴性对照组相应抑制率的差异见表3。

表3 芦笋总皂苷对S180、H22荷瘤小鼠免疫器官的影响(n=10)Table3 Effect of total saponin from Asparagus officinalis on immune organs of tumor-bearing mice (n=10)

由表3可见，环磷酰胺阳性对照组小鼠给药后，脾脏指数和胸腺指数均明显下降，说明环磷酰胺对小鼠的脾脏和胸腺有较大的抑制作用；阳性对照5-氟脲嘧啶对小鼠的胸腺系数有抑制作用。而给药组小鼠给予芦笋总皂苷后，3个剂量总皂苷对小鼠脾脏系数和胸腺系数都具有改善作用。但从t检验结果来看，3个剂量组的脾脏指数和胸腺指数与阴性对照组相比没有显着差异，说明芦笋总皂苷在发挥抗肿瘤作用的同时，对小鼠的免疫器官无明显抑制作用。

3 讨 论

近年来对芦笋抗癌研究结果表明，芦笋原汁[10]、提取物[11]对体外培养的肿瘤细胞生长具有抑制作用，且其抗肿瘤活性与芦笋中的碱性糖蛋白、粗皂角苷类等物质[7]有关。此外，也有研究表明芦笋及其提取物具有调节免疫功能作用，可能是芦笋抗肿瘤作用的机制之一[12]。本实验研究结果表明，芦笋总皂苷在中、高剂量时能明显抑制小鼠移植性肿瘤H22、S180的生长，对荷瘤小鼠免疫器官的质量则没有明显的影响。说明芦笋总皂苷是芦笋抗肿瘤的主要药效物质组成成分之一，且无一般抗肿瘤药物的不良反应；芦笋总皂苷抑制H22、S180肿瘤生长的机理一方面与总皂苷直接抑制肿瘤细胞的生长有关，另一方面可能与其调节机体免疫功能有关。本实验的结果与以往报道的芦笋皂苷抗肿瘤的有效部位基本一致，为今后从芦笋中进一步分离、提取抗肿瘤有效成分提供了目标，也为今后制剂工艺的合理优化提供了药效学依据。

[1] HUANG Xuefeng, KONG Lingyi.Steroidal saponins from roots ofAsparagus officinalis[J].Steroids, 2006, 71: 171-176.

[2] HUANG Xuefeng, LIN Yuying, KONG Lingyi.Steroids from the roots ofAsparagus officinalisand their cytotoxic activity[J].Journal of Integrative Plant Biology, 2008, 50(6): 717-722.

[3] 张素华, 王正云, 葛庆丰.芦笋中活性物质提取技术参数及组分鉴定的研究[J].食品科学, 2005, 26(2): 138-141.

[4] 黄雪峰, 罗俊.石刁柏的化学成分[J].中国天然药物, 2006, 4(3): 181-184.

[5] 关钧.芦笋提取物的抗肿瘤作用Ⅱ芦笋提取物对S180小鼠肉瘤细胞DNA和RNA合成的影响[J].蚌埠医学院学报, 1991, l6(2): 116-118.

[6] 陈利铭, 李平途, 林石, 等.芦笋的抗癌研究[J].福建医药杂志, 1989,11(4): 28-29.

[7] SHAO Y, CHIN K, HO C T, et a1.Anti-tumor activity of the crude saponins obtained from asparagus[J].Cancer Letter, 1996, 104(1): 31-36.

[8] KAWANO K, SATO H, SAKAMURA S, et a1.A bitter principle of asparagus.PartⅡ: Isolation and structure of furostaol saponin in asparagus edihle shoots[J].Agric Biol Chem, 1977, 41(1): 1-8.

[9] 赵建华, 宋擎, 汪素芳, 等.芦笋总皂苷含量测定的比色法研究[J].时珍国医国药, 2009, 20(8): 1962-1964.

[10] 糜漫天, 杨家驹, 陈东升, 等.芦笋汁体外抗癌作用的实验研究[J].现代预防医学, 1993, 20(4): 243-244.

[11] 段巧玲, 关钧, 赵学海, 等.芦笋提取物的抗肿瘤作用-Ⅰ芦笋提取物对S180小鼠肉瘤的抑制作用[J].蚌埠医学院学报, 1991, l6(2):114-115.

[12] 杨勤, 庄宗杰, 吴锦忠, 等.芦笋对小鼠细胞免疫机能的影响[J].贵阳医学院学报, 1992, 17(4): 250-254.