杨秀林，周厚荣，刘海健，杨娇荣，周 霞

（贵州省人民医院急诊科，贵阳 550002）

尽管心肺复苏后自主循环恢复（restoration of spontaneous circulation，ROSC）成功率有了极大提高，但ROSC后大约75%的患者死于进展性的复苏后多器官功能障碍综合征（post－resuscitation multiple organ dysfunction syndrome，PRMODS），多项临床研究表明PR－MODS和全身炎症反应有关［1］。乌司他丁（ulinastatin，UTI）是一种广谱的蛋白酶抑制剂，具有抑制水解酶，稳定溶酶体膜，抑制多种炎症介质及免疫调节作用。为此，推测乌司他丁可能减轻ROSC后的全身炎症反应，改善PR－MODS。本研究特通过动物实验，考察UTI对心肺复苏后大鼠心功能、细胞因子的干预作用。

1 材料与方法

1.1 材料和仪器 实验动物：健康成年SD大鼠 （重庆大坪医院野战外科研究所医学实验动物中心，生产许可证号：sCXK（渝）2007－0005）20只，雌雄不限，体质量310～450g。乌司他丁（广东天普生化医药股份有限公司，国药准字H19990134，批号：03051203）。大鼠脑钠肽（BNP）、心肌肌钙蛋白 T（cTnT）、白介素－12（IL－12）、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供，酶链免疫吸附试验（ELISA）法由贵州省人民医院中心实验室专人操作。ASB－240U生物信号采集分析系统（成都傲生科技公司）、ALC－V9动物呼吸机（上海奥尔特生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 实验动物处理 随机将SD大鼠分为3组：A组（不进行窒息及心肺复苏，仅进行麻醉和气管切开插管、血管穿刺；n＝8）；B组（静脉注射生理盐水4mL·kg－1，心搏骤停4min后给药；n＝6）；C组（乌司他丁5万 U·kg－1＋生理盐水3 mL·kg－1，5万 U配制成1mL，心搏骤停4min后给药；n＝6）；其中B组和C组按时间又分为复苏后0和6h2小组；术前实验动物可自由饮水但禁食。B、C组间体质量（380±21）g vs.（380±19）g、窒息导致 CA时间（423±26）s vs.（402±22）s、心肺复苏（CPR）持续时间（192±110）s vs.（173±46）s、ROSC时间（612±116）s vs.（575±47）s，组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 各组间复苏即刻、复苏后6h±LVdp.dt－1max、LVEDP、MAP变化（）

表1 各组间复苏即刻、复苏后6h±LVdp.dt－1max、LVEDP、MAP变化（）

a：P＜0.01，与A组同时点比较；b：P＜0.01，与同组0h比较；c：P＜0.01，与B组同时点比较。

项目复苏后 A组（n＝8） B组（n＝6） C组（n＝6）0h 7.98±1.32 8.10±1.73 7.81±1.306h 7.30±1.12 2.85±0.91ab 5.48±1.44abc－LVdp／dt max（mmHg／s×103） 0h 5.48±1.35 5.86±1.00 6.12±1.346h 5.19±1.43 1.83±0.91ab 4.45±1.45abc LVEDP（mmHg） 0h 3.50±2.11 3.04±1.48 3.36±1.176h 3.52±2.19 15.98±5.81ab 9.23±4.94abc MAP（mmHg） 0h 92.42±15.61 88.74±13.39 90.61±16.766h 94.52±13.80 60.18±14.10ab 82.26±14.58＋LVdp／dt max（mmHg／s×103）c

表2 各组间复苏即刻、复苏后6hBNP、cTnT、TNF－α、IL－12变化（，pg·mL－1）

表2 各组间复苏即刻、复苏后6hBNP、cTnT、TNF－α、IL－12变化（，pg·mL－1）

a：P＜0.01，与A组同时点比较；b：P＜0.01，与同组0h比较；c：P＜0.01，与B同时点比较。

项目 复苏后 A组（n＝8） B组（n＝6） C组（n＝6）286h 167.61±49.32 610.52±140.86ab 405.62±100.33abc cTNT 0h 3.72±1.13 3.92±0.90 4.01±1.126h 3.72±1.13 133.04±41.02ab 63.38±8.65abc TNF－α 0h 30.72±11.50 46.99±18.71 56.44±19.676h 30.72±11.50 242.27±61.56 ab 133.30±32.87abc IL－12 0h 133.90±41.02 140.25±23.46 172.58±47.636h 133.90±41.02 672.70±83.94ab 336.29±73.6 BNP 0h 167.61±49.32 181.13±56.21 165.54±65.abc

1.2.2 心肺复苏模型 依据Hendrickx等窒息法心肺复苏模型，并参照Utstein复苏实验研究模式设计动物实验模型：仰卧固定于手术台上的动物，采用腹腔注射麻醉（乌拉坦，首剂为2g·kg－1）后，气管切开置管接呼吸机；平均动脉压（MAP）、心率（HR），Ⅱ导ECG等数据由左颈动脉置管连接生物信号采集分析系统采录。术后稳定10min（室温），采用夹闭气管置管法，于呼气末持续夹闭气管置管致CA持续240s［CA标准：（1）心电图示心电静止、室颤、心电机械分离；（2）心尖区心脏搏动消失；（3）动物皮肤黏膜明显发绀。］后，即胸外按压（频率为200次／分），静脉注射肾上腺素（0.02mg·kg－1）并呼吸机辅助纯氧通气（80次／分；潮气量6mL·kg－1）等方法进行动物心肺复苏（15min无效者放弃复苏），同时监测并记录颈动脉血压和心电图，ROSC 3h后逐步撤离呼吸机，实验结束（取血6mL送检，处死实验动物）。时间数据收集：窒息导致CA的时间、心肺复苏时间和ROSC时间。

1.2.3 观察指标 复苏前、复苏后0h及复苏后6hHR、MAP、左室内压最大上升与下降速率（±LVdp.dt－1max）、左室舒张末压（LVEDP）、脑钠肽（BNP）、IL－12、肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、心肌钙蛋白（cTNT）。

1.3 统计学处理 采用SPSS 11.0软件进行统计学分析，计量资料以表示，同组不同时点采用成组设计资料的t检验，不同组间均数比较采用单因素方差分析，方差齐采用成组设计方差分析，两两比较用SNK法，如方差不齐，采用Wilcoxon检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组间复苏即刻、复苏后6h±LVdp.dt－1max、LVEDP变化 与A组及同组复苏后0h比较，B、C组复苏后6h±LVdp.dt－1max值均降低（P＜0.01），而复苏后6hLVEDP值均升高（P＜0.01）；B组复苏后6hMAP低于复苏前、A组和C组（P＜0.01）；与B组比较，C组复苏后6h±LVdp.dt－1max、MAP值均高于B组（P＜0.01），而LVEDP低于B组（P＜0.01）。见表1。

2.2 各组间复苏即刻、复苏后6hBNP、cTnT、TNF－α、IL－12变化 与A组及同组复苏后0h比较，B、C组复苏后6h BNP、cTnT、IL－12、TNF－α水平均升高（P＜0.01）；与 B组比较，C组复苏后6hBNP、cTnT、IL－12、TNF－α水平低于 B组（P＜0.01）。见表2。

3 讨 论

心脏骤停CPR后死亡者中心功能不全占1／3以上，最终死亡的主要危险因素之一是复苏术后高达90.6%全身炎症反应综合征（SIRS）发生［2－3］。导致 SIRS的炎症介质中，IL－12能引起NK细胞和T淋巴细胞分泌TNF－α，后者又反过来激活巨噬细胞，诱导其分泌其他促炎因子，因此，IL－12在SIRS和MODS的发生发展中起重要作用［4］。而高度依赖于IL－12表达的TNF－α是触发缺血再灌注损伤时炎症瀑布效应的关键因子［5］，对其表达的抑制，将使缺血再灌注损伤程度均明显减轻［6－7］。对众多研究结果归纳显示炎性因子、心肌细胞凋亡、微血管损伤、钙离子超载、自由基等与复苏后心功能不全密切相关［8］。本次实验显示，心肺复苏后大鼠体内 TNF－α和IL－12表达较对照组明显升高，提示复苏后大鼠体内存在炎性细胞激活。

UTI可竞争性抑制酶底物结合部位，同时独立抑制多种酶的活性［9］，具有拮抗心肺复苏后TNF－α及降低心肌再灌注损伤作用［10－11］，对SIRS、MODS等引起的组织或器官损伤具有保护作用［12］。鉴于乌司他丁研究资料的结果与本实验具有较大的相关性，特选为本实验研究用药。

动物实验结果显示：与A组比较，B、C组复苏后6h±LVdp.dt－1max值均低于A组（P＜0.01），而复苏后6hLVEDP值均高于C组（P＜0.01）；与同组0h比较，B、C组复苏后6h±LVdp.dt－1max值均降低（P＜0.01），而复苏后6hLVEDP值均升高（P＜0.01），提示复苏后心功能不全普遍存在，结果也印证相关资料的报道［1］。

对心肌损伤的标志物cTnT［13］和心脏负荷的标志物BNP的监测结果显示：心肺复苏前各组cTnT和BNP值差异无统计学意义（P＞0.05），复苏成功后6hB、C组均有不同程度升高，尤以B组升高幅度最大，推测复苏后存在一定程度的急性心肌损伤及心肌细胞坏死。然而C组升高幅度小于B组（P＜0.01），从另外一个角度证实UTI具有减轻心肺复苏后心肌损伤的作用［14］。

实验结果表明UTI可有效的调节IL－12、TNF－α，与B照组及A组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；同时，C组MAP、±LVdp.dt－1max、LVEDP数据优于B组，揭示 UTI还具有改善了复苏后心功能不全的作用［15］。

本研究结果表明：乌司他丁对心搏骤停－心肺复苏实验大鼠，具有拮抗炎症介质、减轻心肌损伤和改善了复苏后心功能不全的作用。乌司他丁使用方式对实验结果的影响评价后续实验将继续进行。

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